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江香薷提取物体外清除自由基活性的研究 08 制药工程 武晓英 王奕智 周青 摘 要 江香薷是2010版《中国药典》收载的药材之一，江西省新余市分宜县和渝水区等地是该种药材的道地产地。目前,对江香薷的化学成分研究的比较多，但是对其在体外的抗氧化能力及生物活性研究涉及较少。本文对通过检测江香薷水提物体外清除DPPH自由基、羟基自由基、超氧阴离子的能力探讨其抗氧化的能力，从而为深度研究开发该药材提供必要的基础数据。 关键词：江香薷 提取 清除自由基 抗氧化 1 前言 香薷（Elsholtzia ciliata）为传统的辛温解表中药，具有发汗解表、利水消肿、调中温胃止呕的作用，中医主要用于恶寒发热、头痛无汗、腹痛吐泻、小便不利等症的暑湿感冒。江香薷作为江西特产，在省内有广泛的种植和大量的资源，但由于对生物活性及药理作用研究的相对滞后，严重制约了其深加工产品的发展，如临床药剂、食品添香剂、防腐剂及保健系列产品都还不能进行很好的开发。这些都有待对江香薷的深入研究，为其进一步的开发和利用提供理论依据和技术指导。 香薷属植物的化学成分研究目前都很全面。研究发现其除了具有挥发油成分外，还有非挥发性成分中含有黄酮类、烃类、甾醇类、高级脂肪酸类多糖类物质等物质通过查阅文献，我们发现，目前大部分研究集中于江香薷挥发油总成分的抗菌、抗炎、抗病毒、对神经系统的抑制作用等，而对于非挥发性成分尤其是多糖及黄酮类化合物这些具有广泛生物活性的物质的研究很少。因此，我们认为，研究江香薷的水提物在体外清除自由基活性有助于该药材的开发。 2实验目的 通过对江香薷有效成分的提取，从清除DPPH自由基、羟基自由基、超氧自由基三个方面对比，了解江香薷提取物清除自由基能力与其浓度的线性关系。从而推测其抗氧化，抗衰老的能力，为江香薷开发提供理论依据。 3实验原理 江香薷提取物体外清除自由基能力测试 3.1 江香薷提取物对DPPH（1,1-二苯基-2-苦苯肼自由基）自由基清除能力测试 DPPH·（图1）是一种稳定的自由基，它在517nm 处有强吸收（深紫色），当有自由基清除剂存在时，由于与其电子配对而使其吸收逐渐消失，其褪色程度与其所接受的电子数成定量关系，所以用此方法测定较为适合。从已查文献来看，未有这方面研究的报道，作为初步摸索江香薷提取物的体外抗氧化活性，可以考虑先采用DPPH模型。 图1 DPPH（分子量394） 利用DPPH-无水乙醇在517nm出游紫色团的特征吸收峰以分光光度法测后，在517 nm 处吸光值的下降表示其对DPPH 自由基的清除能力。 3.2 江香薷对羟基自由基清除能力测试 羟基自由基是活性氧中活性最高且造成损伤最大的一种, 它可以与生物体内的多种分子作用, 造成糖类、蛋白质、核酸和脂类等物质的氧化性损伤, 造成细胞坏死或突变. 羟自由基清除率是反映药物抗氧化作用的重要指标.而且体内无清除羟基自由基的有效机制，故对其的清除对抗氧化极为重要。 FeSO4、H2O2、水杨酸产生羟基自由基，在510nm处有吸收峰，测定待测液的清除能力 3.3 江香薷对超氧自由基清除能力测试 测定采用邻苯三酚( PR )自氧化法。邻苯三酚在碱性条件下能迅速自氧化，释放出O-2，生成有色的中间产物，由此邻苯三酚在自氧化过程中出现一系列颜色变化，可以利用分光光度法进行测量当有抑制剂存在时，可清除O-2，从而阻止中间产物的积累，根据吸光度数值的变化可求出抗氧化剂的活性。 4 实验设备 烧瓶、恒温水浴锅、旋转蒸发仪、天平、滤纸、烧杯、抽滤装置、紫外分光光度计、离心机等。 5 实验材料及试剂 a. 试剂 不同浓度的供试品溶液 95%乙醇溶液 0.1mol/L的DPPH无水乙醇溶液16.0mmol/L FeSO4 0.04mmol/LH2O2 6.0mmol/L水杨酸 0.05 mol/LTris-HCl 缓冲液 2.5 mmol/L 邻苯三酚 8 mol/L HCl0.1 mL等 b．材料的处理 将江香薷全草阴干，切碎，尽量研碎，研细。 6.1江香薷的提取 6.1江香薷的提取 6.1.1 取处理好的江香薷3Kg，置于大烧瓶中，用10倍量的95%的乙醇加热回流提取3次，每次一小时，回收溶剂至无醇味，加水稀释，分别用石油醚 ( 60～90℃) ,氯仿 ,乙酸乙酯 ,正丁醇萃取，回收溶剂得到四部分萃取后的浸膏。浸膏用各部分萃取剂的分析纯溶解，配成浓度为0.5g/L的溶液，作为供试品备用。 6.2抗自由基能力测试 6.2.1抗自由基能力测试 待测样品用水稀释成10、20、40、60、80、μ