实验五SDSPAGE蛋白质电泳准备实验.pptVIP

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2017-09-10 发布于四川
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实验五SDSPAGE蛋白质电泳准备实验.ppt

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实验五SDSPAGE蛋白质电泳准备实验

实验五 SDS蛋白质电泳准备实验溶液的配置实验内容一、变性蛋白质电泳系列溶液 1、单体母液（第一小组） 25 ml 丙烯酰胺 7.50 g 甲叉双丙烯酰胺 0.20 g 去离子水定容至25 ml ,定性中速滤纸过滤，棕色试剂瓶4℃存放。 2、 10％ (w/v) SDS （第一小组） 10ml SDS 1.0 g 去离子水 10 ml 5、10％的过硫酸铵（1ml）（现配现用）（第三小组）过硫酸铵 0.10 g 去离子水1.00 ml,4℃密闭存放。 6、电极缓冲液(pH=8.30) 500 ml(1×) ）（第三小组） Tris-Base 1.5g 甘氨酸 6.25 g SDS (10%) 2.5ml 去离子水溶解。 7、样品缓冲液储液（2× ）（第四小组） 2.5 ml 浓缩胶缓冲液（4×） 1.25 ml SDS（固体干粉） 0.1 g 甘油 0. 5 ml 溴酚兰 1 mg 加去离子水0.75ml 溶解，加50ul巯基乙醇，室温保存。 8、染色液 400ml 考马斯亮兰R－250 1.0 g 甲醇 182ml 冰醋酸 36.8 ml 水 182 ml 9、脱色液（第四组） 500 ml 甲醇 228.00 ml 冰醋酸 36.00 ml 水 236.00 ml * 3、分离胶缓冲液（4×，pH=8.80，25 ml）（第二小组） Tris-Base(1.5 mol/L) 4.54 g 10％(w/v)SDS 1 ml 用20ml去离子水溶解，再用浓HCl调节pH到8.8，过滤，定容到25ml,4℃存放。 4、浓缩胶缓冲液（4× ，pH=6.80，50 ml ）（第二小组） Tris-Base(0.50 mol/L) 3