马传贫病毒中国株S2基因原核表达及多克隆抗体制备.pdf

摘 要 infectiousanemia 马传染性贫血病毒(Equine virus，EIAV)是反转录病毒 科馒病毒属成员之一，在基因组结构和抗原性上与人艾滋病病毒(Human immunodeficiencyvirus，HIV)十分相似，可以引起马属动物的一种重要传染病， 以贫血、持续感染、反复发热为特征，终生持续感染。 EIAV是结构最简单的慢病毒，其基因组RNA包括三个结构基因，依次为gag, 病毒，而韶基因目前仅存在于EIAV中。在EIAV感染马体内能够持续检测到S2蛋 白抗体的存在，但其作用目前尚不完全清楚。对我国多株EIAV强毒株和疫苗株的 跖基因核序列进行分析后发现，．铭基因是强毒株和疫苗株之间差异最大的基因， 核苷酸和氨基酸的差异率分别是4．1％和10．4％。同时国外已有报道，构建．铭失活 的致病性感染性分子克隆，其体外复制动力学指标没有受到影响。但该感染性克隆 的体内感染实验发现，与亲本病毒相比，缺失．铭基因显著降低了病毒的复制水平 和致病性。以上结果提示EIAV的韶基因是影响病毒在体内复制和致病特性的重要 因素。因此，对田相关生物学特性进行深入研究，有助于迸一步了解EIAV的致病 机理和机体对该病毒的免疫应答机制。本研究旨在为韶反向遗传研究提供行之有 效的检测手段，并为S2蛋自的功能研究打下基础。 后将重组质粒转化大肠杆菌BL21，用IPTG诱导后成功表达出与预期大小相符的约 20kDa的融合蛋白，表达形式为包涵体。表达产物经镍离子亲和树脂纯化后，得到了 纯度较高的带有6XHis标签的目的蛋白。用所获得的纯化产物经四次肌肉注射新西 兰白兔，制备兔抗S2多克隆抗体。经对EIAV病毒颗粒的Westerblot检测表明，本 研究制备的S2多克隆抗体可以与EIAV的S2蛋白发生良好的特异性结合。该抗体的 制备对进一步研究EIAV的生物学特性，特别是谨基因的功能，提供了重要的研究手 段。 关键词：马传染性贫血病毒；亿基因；原核表达；多克隆抗体 oftheS2 of aChineseEIAVstrainin Expressiongene E．coliand of antibodiestheS2 development polyclonal againstprotein Abstract infectiousanemia memberoflentivims Equine virus(EIAV)，a whichrelated family 埘thhuman a infectionand virus，causes chfomcdiseasein immunodeficiencylife—long horses characterized of byperiodic episodesfever,plasma thrombocytopenia． EIAV isthe framework simplest lentivirus．Inadditiontothe enly gag，pol,andgenes， which in are the all