转染GDF-5的BMSC自体移植及应用GAM对延缓椎间盘退变疗效的比较.pdfVIP

Ⅲrll l l lIFI I IIl lrlll llll ＼1 目 录 一、 摘要 中文论著摘要……………………………………………………………………1 英文论著摘要……………………………………………………………………4 二、 英文缩略语……………………………………………………………………7 三、 论文一 前言……………………………………………………………………………8日U舌……………………………………………………………………………毯 研究资料与方法………………………………………………………………8 结果………………………………………………………………11 讨论……………………………………………………………………………12 结论……………………………………………………………………………14 创新性评价………………………B O OO………………………………………15 参考文献………………………………………………………………………21 四、 论文二 前言……………………………………………………………………………23 日U吾……………………………………………………………………………Z3 研究资料与方法………………………………………………………………23 结果………………………………………………………………28 讨论…………………………………………………………·………………··29 结论……………………………………………………………………………31 创新性评价………………………………………………………………………32 参考文献………………………………………………………………………34 五、 附录 综述…………………………………………………………………………36 在学期间科研成绩…………………………………………………………44 致谢…………………………………………………………………………45 个人简介……………………………………………………………………46 ·中文论著摘要· 间盘退变疗效的比较 目 的 腰椎间盘突出症是骨科的常见病和多发病，也是腰腿痛的主要原因，严重影 响了人们的生活质量，并且丢失大量的社会劳动力，给社会带来沉重的负担。一 般认为椎间盘突出是在椎间盘退变的基础上发生的，其共同特征是髓核内蛋白多 糖含量的减少，因此可以通过生长因子刺激髓核细胞增加蛋白多糖的合成，减少 分解来缓解甚至逆转退变的过程。 随着基因强化组织工程学的发展，对椎间盘退变进行分子水平上的治疗成为 可能，本实验通过采用基因治疗的两种方法：干细胞体外基因修饰和直接体内转 染椎间盘细胞，使其在髓核组织内持续表达GDF．5，来对延缓椎间盘退变的效果 进行比较，以期为临床应用基因疗法治疗椎间盘退变提供依据。 方法 (一)经超顺磁性氧化铁标记的自体BMSCs在兔椎间盘内存活 时间的研究 1、兔BMSCs分离培养及检测 采用密度梯度离心法，分离、纯化兔骨髓问充质干细胞，进行体外培养扩增， 并进行细胞形态学、组织化学染色观察。 2、SPIO标记兔BMSCs及检测 取第三代原代培养细胞，采用SPIO．PLL复合物标记细胞，并进行细胞普鲁 士蓝铁染色、透射电镜检测是否标记成功，MTT法测定标记细胞增殖是否受到影 响。 3、标记细胞在椎间盘内存活时间的研究 实验组和对照组分别注入经SPIO标记和未标记的BMSCs悬液，术后2、4、 6、8周，实验组和对照组分另0取相应椎间盘行普鲁士蓝铁染色，镜下观察在细胞 质内是否出现蓝染颗粒。 (二)体内体外两种转染方法对延缓椎间盘退变效果的比较研究 用倒置显微