活血解毒中药有效部位对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块炎症反应影响.docVIP

活血解毒中药有效部位对ApoE基因敲除小鼠动脉粥样硬化斑块炎症反应影响摘要：目的 观察活血(三七总皂苷)、解毒(黄连提取物)、活血解毒中药有效部位(虎杖提取物、大黄醇提物)对ApoE基固敲除小鼠动脉粥样硬化(AS)斑块炎症反应的影响。方法 70只(6～8)周龄小鼠ApoE基因敲除小鼠子高脂饮食喂养13周后，待其形成成熟的AS斑块后，随机分为活血解毒组(虎杖提取物组、大黄醇提物组)、活血对照组(三七总皂苷组)、解毒对照组(黄连提取物组)、模型组、阳性对照组(辛伐他汀组)。继续高脂喂养并按体重比折算的临床推荐剂量给予相应药物治疗13周后，处死动物，检测血清超敏C反应蛋白(hs-CRP)及可溶性白细胞分化抗原40配体(sCINOL)水平，并取主动脉根部4个切面，分别行HE染色和Movat染色，用免疫组化染色法观察小鼠主动脉根部斑块内过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR-r)的蛋白表达，实时荧光定量PCR法检测主动脉内PPAR-r及核转录因子kB(NF-kB)mRNA的表达。结果 与模型组比较，大黄醇提物组及虎杖提取物组血清hs-CRP和sCD40L水平均明显降低(P＜0.01或P＜0.05)。解毒对照组黄连提取物主动脉斑块内PPAR-r蛋白及基因表达均明显增多(P＜0.01)，而中药各组小鼠主动脉斑块内NF-Kb d3mRNA的表达与模型组比较均无统计学意义(P＜0.05)。结论 采用临床推荐剂量治疗的活血解毒中药有效部位中，虎杖提取物和大黄醇提物可明显降低ApoE基因敲除小鼠血清炎症标志物hs-CRP及sCD40L水平，其效果优于单纯活血或解毒组，但对PPAR-r和NF-kB的作用并不明显。而黄连提取物却可明显增加具有抗AS炎症作用的保护性受体PPAR-r的蛋白和基因表达，提示其作用环节有所不同，值得深入研究。 关键词：易损斑块；活血；解毒；动脉粥样硬化；炎症反应 中图分类号：R543.5　R285.5　文献标识码：A　文章编号：1672-1349(2007)12-1202-04 Ross动脉粥样硬化(AS)炎症假说认为，炎症反应贯穿于AS起始、进展及斑块破裂血栓形成的全过程，是斑块不稳定发生破裂的中心环节。抑制炎症反应，防止斑块破裂现已成为该领域的重要研究方向。既往的研究结果表明活血中药酒大黄具有良好的稳定易损斑块作用，效果优于其他常用活血中药组，其机制与抑制炎症反应有关，由于大黄兼有活血和解毒作用，现代药理研究表明清热解毒中药多具有抗炎的类效应，而抑制炎症反应又是稳定易损斑块的重要机制，为此，提出了“活血解毒―抑制炎症反应―稳定斑块”的假说，并在此基础上，深入研究活血、解毒、活血解每中药有效部位三七总皂苷、黄连提取物、虎杖提取物、大黄醇提物对ApoE基因敲除小鼠主动脉粥样硬化斑块炎症反应的影响。 1 材料与方法 1．1 动物 (6～8)周龄ApoE基因敲除小鼠(品系C57BL/6J，北京大学实验动物中心自美国Jackson实验室引进并培育)70只，均为雄性，体重18g～20g，饲以含脂肪21％、胆固醇0.15％的高脂饲料(60Cor灭菌照射处理)，饲养条件为2级，室温保持在22℃～24℃，相对湿度50％，光照时间07:00～19:00。 1．2 药物 虎杖提取物由湖南省洪江华光生物有限责任公司提供，批号大黄醇提物及黄连提取物均由西安奥晶科技发展有限公司提供，批号分别为050841、050910；血塞通片(三七总皂苷)由云南特安呐制药股份有限公司提供，批号为050118；辛伐他汀(商品名舒降之)，由杭州默沙东制药有限公司出品。批号为P1196， 1．3 试剂与仪器 小鼠血清超敏C反应蛋白(hs-CRP)和可溶性白细胞分化抗原40配体(sCD40L)ELISA试剂盒购于RB公司(进口分装)；一抗小鼠来源单克隆抗体过氧化物酶体增殖物激活受体r(PPAR-r)由Sant Cruz公司提供；二抗为通用型二抗，购自Sant Cruz公司；cDNA合成试剂盒和荧光定量RCR试剂盒均由TaKaRa公司提供；PPAR-R及核转录因子kB(NF-kB)的上下游引物均由Invitrogen公司提供；全自动生化测定仪型号：RX-2000，美国TECHNICON公司生产；gemeAmpPCR Systerne 9700由美国ABI公司提供；定量PCR仪型号Rotor gene-3000A，芬兰基因公司提供；美国Image-ProPlus Version 5.0(IPP)图像分析软件。 1．4 分组及给药方法 小鼠喂养13周后，随机处死4只，取主动脉根部，HE染色普通光镜下观察，确定AS形成后，其余小鼠随机分为6组：辛伐他汀组、虎杖提取物组、大黄醇提物组、黄连提取物组、模型组及三七总皂苷