pBI121表达体及其转化植株的快速鉴定.pdfVIP

( ) 　34 (2) : 137～142 , 2008 浙江大学学报 农业与生命科学版 Journal of Zhej iang University (A gric Life Sci) 文章编号 (2008) 020 13706 pBI121 表达载体及其转化植株的快速鉴定 王华新 , 曹家树 , 向 珣 , 余小林 , 叶纨芝 (浙江大学 蔬菜科学研究所 ,农业部园艺植物生长发育与生物技术重点开放实验室 ,浙江 杭州 3 10029) ( ) 摘 　要 : 以双元质粒 pB I12 1 为基础分别构建正义 、反义和 RN A 干涉 RN Ai 植物表达载体. 根据 pB I12 1 质粒多克隆位点两侧的DN A 序列设计 1 对通用引物 , 以表达载体的重组质粒 DNA 为模板进行 PCR 扩增 ,使用限制性内切酶 B am H Ⅰ酶切 PCR 产物 以验证扩增条带的真实性 ,从而可以快速鉴定 pB I12 1 表达载体的重组克隆. 这种方法也可用于快速鉴定上述表达载体的转基因植株 ,其检测结果与 常规鉴定方法完全一致. 此外 ,可以根据需要对表达载体的阳性 PCR 扩增产物进行测序 ,测序结果能够 精确地显示出重组 pB I12 1 表达载体中目的片段的插入方向以及插入序列是否出现碱基突变. 本研究为 各种 pB I12 1 表达载体及其转基因植株的鉴定提供了一种快速 、有效的方法. 关 　键 　词 : pB I12 1 质粒 ; 植物表达载体 ; 转基因植株 ; 鉴定方法 中图分类号 : Q789 　　　文献标识码 : A WAN G Huaxin , CAO J iashu , XIAN G Xun , YU Xiaolin , YE Wanzhi ( Key L aboratory of H orticul t u ral P l ant Grow t h D evelop ment B iotechnology of M i nis t ry of A g ricul t u re , I ns ti t ute of Veg et able S ecience , Z hej i ang Uni ve rs i ty , H angz hou 3 10029 , Chi na) Rapid method to identify expression vectors and tansgenic plants based on pBI121 plasmid. J ournal of Zhej iang U niver sit y (A gric Life Sci) , 2008 ,34 (2) :137142 Abstract : To screen rapidly po sitive clones , recombinant plant expression vector s constructed based on the binary vector pBI12 1 , containing sense , antisense or RNA interference ( RNAi) cassette respectively , were amplified by PCR with a univer sal primer pair designed according to the flank sequence of multiple clone site in pBI12 1 , and PCR product s