23-plex Y-SNPs复合扩增体系在法医学应用探究.docVIP

23-plex Y-SNPs复合扩增体系在法医学应用探究 　 作者：张爱平 刘超 李越 刘长晖 陈丽伟， 葛璐璐， 陈晓晖 【摘要】 【目的】 应用SNaPshot技术建立23-plex Y-SNPs的复合扩增体系，研究其在法医学中的应用价值。【方法】 从Y染色体单体群命名树上选择23个Y-SNP位点：P164、P203、P148、P145、M89、P151、M216、P128、P157、P149、P131、P199、P123、P191、P201、M111、M9、P132、P200、P197、M119、P136和M134，进行复合PCR扩增，PCR产物纯化后利用荧光标记单碱基延伸技术(SNaPshot试剂盒)结合毛细管电泳技术对单核苷酸多态性进行检测，应用该体系调查了290名广东地区无亲缘关系的男性个体。【结果】 所建立的23个Y-SNPs检测体系，各位点均具有遗传多态性，基因多样性范围为0.013 7 ～ 0.491 2。在290名男性中检测到143个单体型，单体型多样性为0.990 7。【结论】 该23个Y-SNPs检测体系能快速而准确的对样本进行SNP分型，在法医学、人类学和相关学科的研究中具有较高的应用价值。 【关键词】 个体识别; 单碱基延伸(微测序); SNaPshot试剂盒; 单核苷酸多态性; Y染色体 　Abstract： 【Objective】 To develope a robust single nucleotide polymorphism (SNPs) typing assay with co-amplification and to type 23 human Y chromosome SNPs using SNaPshot kit. 【Methods】 Markers were drawn from the phylogenetic tree of Y chromosome：P164，P203，P148，P145，M89，P151，M216，P128，P157，P149，P131，P199，P123，P191，P201，M111，M9，P132，P200，P197，M119，P136，and M134. All 23 Y-SNPs in one reaction were amplified; the pooled PCR products were purified. The minisequencing reactions were performed simultaneously for all 23 Y-SNPs with fluorescein-labeled dideoxynucleotides. A total of 290 male Chinese in Guangdong were genotyped by capillary electrophoresis and multicolour fluorescence detection. 【Results】 A 23-plex Y-SNPs co-amplification system was developed. All of the Y-SNPs are polymorphic in Chinese. The gene diversity of the Y-SNPs ranged from 0.013 7-0.491 2. A total of 143 haplotypes were found， the haplotype diversity was calculated to be 0.990 7. 【Conclusion】 The 23-plex Y-SNPs system developed is efficient， high-throughput and appears to be suitable for forensic science and anthroponomy. 　　人类Y染色体除拟常染色区外，绝大部分为非重组区，在减数分裂中不发生重组，以单倍型的形式呈男性伴性遗传，为男性所特有。因此Y-DNA序列携带男性迁徙、进化史的信息，被广泛应用于人类的起源和进化研究。虽然Y-STR标记多态性程度较高并已广泛应用，但与常染色体STR基因座一样，具有较高的突变率。Y-SNPs的突变率低，一个位点通常只有1次突变，也不易受重组的影响，因而是进化事件的忠实记录者，可以鉴定稳定的谱系关系，其所构成的单倍型组保持完整，已经被广泛应用于研究世界人群的历史、进化和迁移模式[1]，且其密度高、代表性强、遗传稳定性高、易于实现分析的自动化，因而又广泛应用于遗传疾病、药物学研究等各个方面[2]。通过对Y