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Glypican3在多种肿瘤中表达 　【摘要】 目的: 研究Glypican3在多种肿瘤中的表达及意义。方法: 免疫组化方法检测Glypican3在461例多种肿瘤及部分正常组织中的表达。结果: 多种肿瘤中: Glypican3在肝癌中阳性率为74.4%(119/160), 大肠癌中Glypican3阳性率为66.0%(132/200), Glypican3在肝癌及大肠癌组织中表达明显高于癌旁组织(Plt;0.05); Glypican3在子宫内膜癌（3/16）, 肺癌（3/32）, 乳腺癌（1/15）, 卵巢癌（1/11）, 胰腺癌（0/15）, 食管癌（1/12）等肿瘤中表达较低, Glypican3在癌组织中的表达与癌旁组织无统计学意义。在正常组织如肾, 胎盘, 乳腺当中Glypican3表达为阳性, 其他多种正常组织中表达均为阴性。结论: Glypican3在肝癌、 大肠癌、 肺癌等中均有不同程度表达, 且表达意义不尽相同, Glypican3可能在多种肿瘤发生、 发展中起重要作用。 【关键词】 多种肿瘤 Glypican3 免疫组织化学 Glypican3是一种膜性硫酸乙酰肝素糖蛋白(heparansulfate proteoglycan, HSPG) , 通过磷脂酰肌醇锚定在细胞膜上。Glypican3在细胞的生长发育中起着重要的调控作用, 在不同的恶性肿瘤中表达差异很大［1］。由于该基因的突变导致了细胞增殖、 凋亡失去平衡, 可能是肿瘤发生的重要原因［2］。我国是肿瘤高发地区, 肿瘤的早期诊疗一直是许多学者研究的热点, 探讨肿瘤的发病机制及预警分子将为多种肿瘤的早期诊断及临床治疗提供新的思路。我们利用Glypican3多克隆抗体进行免疫组化检测Glypican3基因在多种肿瘤组织中及部分正常组织芯片中的表达, 以探讨其与多种肿瘤发生发展的关系。 　　1 材料和方法 　　1．1 材料 　　兔抗Glypican3多克隆抗体购自Ramp;D公司。SP试剂盒购于GENE TECH公司。正常组织芯片购自超英公司。标本来源多种肿瘤为西京医院2004/2007年外科手术切除标本。选自术前的肿瘤组织, 经40 g/L甲醛固定, 脱水, 常规石蜡包埋, 制备5 μm厚连续切片。经病理确诊。癌旁组织选自多种肿瘤两端切缘, 并经病理证实无癌细胞浸润。患者中肝癌160例, 大肠癌200例, 子宫内膜癌16例, 肺癌32 例, 乳腺癌15例, 卵巢癌11例, 食管癌12例, 胰腺癌15例, 男性238例, 女性223例; 年龄≤50岁者266例, ＞50岁者195例; 同时选购部分正常组织芯片。 　　1．2 方法 　　1．2．1 Glypican3病理表达的检测 　　操作按SP试剂盒说明书进行, 采用常规SP法检测［3］。石蜡切片常规脱蜡至水, 清洗3次; 30 mL/L的H2O2甲醇室温下45 min以阻断内源性过氧化酶, 清洗3次; 修复抗原: 0.01 mol/L枸橼酸盐缓冲液中, 煮沸3次, 自然冷却至室温, 清洗3次, 正常羊血清封闭45 min, 清洗3次; 加入兔抗人Glypican3多克隆抗体4℃过夜; 复温, 清洗3次, 加辣根过氧化物（HRP）标记的羊抗兔IgG（工作浓度1∶500）, 37℃于湿盒中45 min, 清洗3次, DAB显色, 蒸馏水中止, 苏木精衬染, 自来水反蓝, 梯度酒精及二甲苯脱水透明, 树胶封片。以癌旁肝组织作阴性对照, 以IgG代替一抗作空白对照［4］。 　　1．2．2 结果判定 　　由两位病理医师在不知任何临床和病理资料的情况下对免疫组化结果进行评估。镜下, 随机取5个视野, 根据每个视野中阳性细胞数百分比和染色强弱进行评分［5］。镜下观察肿瘤实质细胞着色广度: 0分, 阳性细胞数比率lt;1%; 1分, 阳性细胞数比率2%～25%; 2分, 阳性细胞数比率26%～50%; 3分, 阳性细胞数比率51%～75%; 4分, 阳性细胞数比率＞75%。着色强度: 0分, 细胞无着色; 1分, 阳性细胞数染色呈淡棕色; 2分, 阳性细胞染色呈棕色; 3分, 阳性细胞染色呈棕褐色。然后判定各标本的染色得分。着色总分（0～12）=广度×强度; 总分分级: 0～3分视为0级, 为阴性表达, 4～6分视为Ⅰ级, 7～9分视为Ⅱ级, 10～12分视为Ⅲ级。0级为阴性, Ⅰ～Ⅲ级为阳性表达［5］。 　　1．2．3 统计学处理 　　采用χ2检验, 选用SPSS10.0统计软件进行数据分析。P＜0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　2．1 Glypican3在多种肿