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HPLC法测定菌毒清颗粒中丹酚酸B含量 　 ; 作者：范辉，宋粉云，钟兆健，肖若媚 【摘要】; 目的 测定菌毒清颗粒中丹酚酸B的含量。方法 采用反相高效液相色谱法，Diamonsid TM C18柱，甲醇-乙腈-0.5%甲酸（体积比31∶10∶59）为流动相，流速为1.0 mL·min-1，检测波长286 nm，柱温为30 ℃。结果 丹酚酸B平均回收率为101.5%，RSD为1.95%（n=6）。结论 该法可用于菌毒清颗粒中丹酚酸B的含量测定。 【关键词】; 菌毒清颗粒；丹酚酸B； HPLC；含量测定 　　Abstract:Objective To determine the content of Salvianolic acid B in Junduqing granules. Methods A RP-HPLC method was established. The chromatographic column was Diamonsil-C18. The mobile phase was methanol-acetonitrile -0.5%formic acid（31∶10∶59） The flow rate was 1.0 mL·min-1,and the detection wavelength was 286 nm. Results The average recovery for salvianolic acid B was 101.5%,precision of the method was 1.95%(RSD,n=6). Conclusion The method can be used for quantitative determination of Junduqing granules. 　　Key words:Junduqing granules；salvianolic acid B；RP-HPLC；Assay 　　菌毒清颗粒是医院制剂，由板蓝根、穿心莲、玄参、茜草、丹参、金银花提取制成，具有清热解毒、抗菌消炎、抗病毒作用。临床用于治疗细菌、病毒感染疾病，如呼吸道、胃肠道、泌尿系统的感染EB病毒阳性的患者。该产品现行标准只收载了定性鉴别反应，有文献报道采用HPLC法测定其中穿心莲内酯、哈巴俄苷的含量［1,2］，但丹酚酸B含量测定未见文献报道。为进一步评价菌毒清颗粒的质量，本文建立了菌毒清颗粒中丹酚酸B含量测定的反相高效液相色谱法，该法具有分离效果好、灵敏、准确等优点，可用于该产品的质量控制。 　　1; 仪器与试药 ; 　　 　　Agilent 1100高效液相色谱仪（安捷伦公司），Agilent 1100系列双元泵，Agilent 1100可变波长检测器，Agilent 1100/化学工作站。DL-360超声波清洗器（宁波石浦海天电子仪器厂），工作频率(4.5±0.05) kHz，输出功率240 W。 ; 　　 　　丹酚酸B对照品（中国药品生物制品检定所，111562-200504），菌毒清颗粒（中山市人民医院），甲醇、乙腈为色谱纯，甲酸为分析纯，水为双蒸水。 　　2; 方法与结果 　　2.1; 样品液制备 　　2.1.1; 对照品溶液的制备; 精密称取五氧化二磷减压干燥器中干燥24 h的丹酚酸B对照品10.00 mg，置50 mL棕色量瓶中，加体积分数为75%的甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密移取10 mL，置50 mL棕色量瓶中，用体积分数为75%的甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液（浓度为40 μg·mL-1）。 　　2.1.2; 供试品溶液的制备; 精密称取菌毒清颗粒样品约4 g，置具塞锥型瓶中，精密加入体积分数为75%的甲醇25 mL，称定重量，超声处理30 min，放冷，称重，用体积分数为75%的甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，弃去初滤液，续滤液0.45 μm滤膜过滤，作为供试品溶液。 　　2.1.3; 阴性对照液的制备; 取处方组成中除丹参外的其余成分制成不含丹参的阴性对照品，按“2.1.2”项下的制备方法处理得阴性对照液。 　　2.2; 色谱条件及系统适用性试验; 色谱柱为 Diamonsil-C18 柱（250 mm×4.6 mm，5 μm，迪马公司），甲醇-乙腈-0.5%甲酸（体积比31∶10∶59）为流动相，流速为1.0 mL·min-1，检测波长286 nm，柱温为30 ℃。分别取对照品溶液（丹酚酸B浓度为12 μg·mL-1）、供试品溶液和阴性对照溶液10 μL注入色谱仪，理论板数以丹酚酸B计算应不低于5 000；丹酚酸B的拖尾因子为0.94，保留时间约为25 min，丹酚酸B与其他组分可基线分离；阴性样品不干扰样品测定（图1）。 　　1.丹酚酸B; A.对照