高中生物-专题2课题2土壤中分解尿素的细菌的分离和计数课件-新人教版选修1.pptVIP

* 课题2 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 【课题目标】 研究培养基对微生物的选择作用，进行微生物数量的测定。 【研究对象】 土壤中能分解尿素的细菌 【达到目的】 （1）从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 （2）统计每克土壤样品中究竟含有多少这 样的细菌 一、课题背景 1、尿素的利用 尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。 2、细菌利用尿素的原因 土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶 CO(NH2)2 脲酶 + CO2 NH3 +H2O 3、常见的分解尿素的微生物 芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。 4、课题目的 ①从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 ②统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌 一.研究思路 ㈠.筛选菌株 ㈡.统计菌落数目 ㈢.设置对照 1、实例： 启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要求，到相应的环境中去寻找。 原因：因为热泉温度70～800C，淘汰了绝大多数微生物只有Taq细菌被筛选出来。 DNA多聚酶链式反应是一种在体外将少量DNA大量复制的技术，此项技术要求使用耐高温（930C）的DNA聚合酶。 ㈠.筛选菌株 　 　 　 要分离一种微生物，必须根据该微生物的特点，包括营养、生理、生长条件等；配置合适的培养基方法： ⑴抑制大多数微生物生长 ⑵造成有利于该菌生长的环境， 结果：培养一定时间后，该菌数量上升，再通过稀释涂布平板法等方法对它进行纯化培养分离。 2、实验室中微生物的筛选原理： 　 　 　人为提供有利于目的菌株生长的条件(包括营养、温度、pH等)，同时抑制或阻止其他微生物生长。 选择培养基：在微生物学中，将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基。 培养基的氮源为尿素，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。 3、培养基选择分解尿素的微生物的原理 15.0g 琼脂 1.0g 尿素 10.0g 葡萄糖 0.2g MgSO4`7H2O 2.1g NaH2PO4 1.4g KH2PO4 4、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基： ①从物理性质看此培养基属于哪类？从功能上属于哪类培养基？ 固体培养基 ②在此培养基中哪些作为碳源、氮源？ 碳源：葡萄糖、尿素 氮源：尿素 选择培养基 1、显微镜直接计数： 利用血球计数板，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。 ㈡.统计菌落数目： 不能区分死菌与活菌； 不适于对运动细菌的计数； 需要相对高的细菌浓度； 个体小的细菌在显微镜下难以观察； 缺点 2.间接计数法（活菌计数法） （1）常用方法： 每克样品中的菌落数＝(C÷V)×M 其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，V代表涂布平板时所用的稀释液的体积(mＬ)，M代表稀释倍数。 当样品的稀释度足够高时，培养基表 面生长的一个菌落，来源于样品稀释 液中的一个活菌，通过统计平板上的 菌落数，就能推测出样品中大约含有 多少活菌。 （2）原理： 稀释涂布平板法。 注意事项 ①为了保证结果准确，一般选择菌落数在 30——300的平板上进行计数。 ②为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出菌落平均数。 ③统计的菌落往往比活菌的实际数目低。 ④涂布平板法所选择的稀释度很重要，一般以三个稀释度中的第二个稀释度所出现的平均菌落数在50个左右为最好。 设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。 ㈢.设置对照： 设置对照的方法： 空白对照：不给对照组任何处理因素。 条件对照：给对照组施以部分实验因素，但不是所要研究的 处理因素。 自身对照：对照组和实验组都在同一研究对象上进行。 相互对照：不单设对照组，而是几个实验组相互对照。 　A同学的结果与其他同学不同，可能的解释有两种。 一是由于土样不同； 二是由于培养基污染或操作失误。 单一变量原则 小结：通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。 方案一：由其他同学用与A同学相同土样进行实验 方案二：将A同学配制的培养基在不加土样的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。 结果预测：如果结果与A同学一致，则证明A无误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失误或培养基的配制有问题。 二.实验的具体操作 ㈠.土壤取样