兔抗人CD1d分子α3结构域抗体制备及鉴定.docVIP

兔抗人CD1d分子α3结构域抗体制备及鉴定 　 作者：陈章权, 黄震, 梁晓东, 何天文, 陆田田 【摘要】 　　目的: 制备兔抗人CD1d分子α3结构域（hCD1dα3）多克隆抗体。方法: PCR法扩增出人hCD1dα3编码区基因, 将其克隆入原核表达载体pET28中, 转化大肠杆菌BL21（DE3）, 用IPTG诱导重组蛋白的表达, 用Ni2+NTA Agarose亲和层析法纯化重组蛋白, 以之为免疫原免疫家兔, 制备多克隆抗体, 并用ELISA、 Western blot及免疫组织化学法检测抗体。结果: 成功构建了hCD1dα3原核表达载体pET28/hCD1dα3, 高效表达并纯化hCD1dα3蛋白, 间接ELISA检测所制备抗体的效价为1∶6400, Western blot显示该抗体能与hCD1d特异结合, 免疫组织化学法检测结果表明该抗体识别人小肠组织中的天然hCD1d。结论: 通过制备重组hCD1dα3蛋白为免疫原, 免疫家兔, 成功地制备了效价高、 特异性好的抗hCD1dα3多克隆抗体。 【关键词】 CD1d α3结构域 表达 抗体 制备 　　[Abstract] AIM: To prepare the rabbit antibody against the α3 domain of the human CD1d (hCD1