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几种中药单体抑制非小细胞肺癌增殖实验探究 　作者：李妍，鞠晓红，任旷，李强，钟越 【摘要】 目的分析4种不同中药单体对非小细胞肺癌SPCA-1的生长抑制作用，为其临床应用提供实验依据。方法采用WST-1还原法分析不同浓度斑蝥素(2.5，5.0，10，20 mg/ml)、去甲基斑蝥素(2.5，5.0，10，20 mg/ml)、β-榄香烯(5，10，20，40 mg/ml)和大黄素(10，20，40，80 mg/ml)对SPCA-1细胞生长增殖的影响。结果β-榄香烯、斑蝥素、去甲斑蝥素和大黄素均能抑制非小细胞肺癌增殖，且呈剂量依赖性，其中去甲斑蝥素的抗肿瘤活性最强，IC50为(7.62±1.35) mg/L。结论4种中药单体成分均能抑制肿瘤细胞SPCA-1的生长增殖，其中显著导致细胞生长抑制的是去甲基斑蝥素和斑蝥素。 【关键词】 肿瘤; 中药; 斑蝥素; β-榄香烯; 大黄素; 去甲基斑蝥素 肺癌是常见的恶性肿瘤,其发病率、病死率在我国居前列，其中非小细胞肺癌的预后比较差。尽管现在的治疗不断取得进展，生存率提高得还是很少[1]。寻找有效的抗癌药物成为肿瘤治疗领域的重要研究内容。中医药在肿瘤治疗中的应用日益受到关注。随着中药有效组分分离、纯化和结构修饰技术的进步，从中药中寻找高效、低毒的抗癌成分已经成为新药开发的重要途径。筛选肺癌细胞敏感的中药单体成分，将有助于推动中药在肺癌治疗中的应用，改进肺癌的治疗效果。本实验分析了4种不同的中药单体对非小细胞肺癌SPCA-1的生长抑制作用，以期为临床治疗非小细胞肺癌提供实验依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料肺癌细胞株SPCA-1购自美国典型生物收藏中心(American type culture collection ，ATCC)。RPMI-1640培养液购自Sigma公司，小牛血清购自黄岩四季青生物试剂有限公司。斑蝥素和去甲基斑蝥素购自大连市医药科学研究所，β-榄香烯购自大连金港制药厂，大黄素购自复旦大学药学院天然药物研究所。WST-1细胞增殖检测试剂盒购自江苏碧云天生物技术公司。 　　1.2 细胞培养 SPCA-1细胞用含10%小牛血清的RPMI1640培养液，在37℃，5% CO2，饱和湿度的条件下连续传代培养，2 d更换1次培养液，实验时取对数生长期细胞。 　　1.3 细胞增殖检测取对数生长期细胞，用0.05%胰酶和0.02 % EDTA消化，1 000 r/min离心5 min收集细胞，调细胞密度为2×104/ml，接种于96孔板，100 μl/孔。待细胞贴壁生长后，分别加入β-榄香烯、斑蝥素、去甲斑蝥素和大黄素4种中药成分至终浓度，液体总量200 μl/孔，每组做4复孔，为实验组(T)。另外设置不加药物的对照组(C) 和不加WST-1溶液的空白对照组(B)。继续培养72 h，参照 WST-1试剂盒说明，检测4种中药单体对细胞增殖抑制的作用。简言之：除空白对照孔外，每孔加入WST-1溶液20 ml，在37℃培养2 h后，酶联检测仪检测450 nm的吸光度值(A450)。按下列公式计算细胞增殖抑制率(Inhibition Rate )，并以3次独立生物学实验的平均值表示最终实验结果。绘制药物浓度-细胞生长曲线，计算抑制50%细胞生长的药物浓度(inhibitory concentration 50%,IC50)。 　　细胞增殖抑制率(%)=[1-(A450T-A450B)/(A450C-A450B) ]×100% 　　1.4 形态学观察对数生长期细胞分别加入不同浓度β-榄香烯、斑蝥素、去甲斑蝥素和大黄素继续培养72 h后，收集细胞，光镜下观察、拍照。 　　2 结果 　　2.1 4种药物对细胞的抑制作用去甲斑蝥素、斑蝥素、β-榄香烯和大黄素对SPCA-1细胞的抑制作用见图1。去甲斑蝥素，斑蝥素，β-榄香烯和大黄素均能抑制SPCA-1细胞增殖，并呈剂量依赖性，其中去甲斑蝥素的抗肿瘤作用最显著， IC50为7.62±1.35 mg/L, 其次为斑蝥素，IC50为(9.14±1.69) mg/L, β-榄香烯和大黄素的IC50分别为(16.71±3.54) mg/L和(23.65±3.87) mg/L。 　　　2.2 药物作用下细胞形态学变化不同中药单体作用24 h，光镜下观察生长状况和细胞形态的变化。与对照组相比，随着去甲斑蝥素浓度的增加，视野中细胞的数量减少，即细胞生长受抑制;同时非贴壁细胞的圆形细胞(G2/M期细胞)比例增加，斑蝥素对细胞生长和形态影响与去甲斑蝥素相似(见图2);β-榄香烯随着浓度的增加，视野中细胞的数量减少，即细胞生长受抑制;同时细胞膜起泡和核皱缩的细胞(凋亡细胞)比例增加;大黄素对细胞生长抑制作用也随药物浓度增加而增强(见图3)。 　　3 讨论 　　中药治