Thermoanaerobacter sp. X514嗜热脂肪酶LipTX的异源表达及酶学性质研究.pdf

现代食品科技 Modern Food Science and Technology 2016, Vol.32, No.11 Thermoanaerobacter sp. X514嗜热脂肪酶LipTX的 异源表达与酶学性质研究 魏涛，杨昆鹏，郏未未，毛多斌 （郑州轻工业学院食品与生物工程学院，河南郑州 450002） 摘要：本文克隆表达了来源于嗜热细菌 Thermoanaerobacter sp. X514 的嗜热脂肪酶LipTX 基因(Teth514_0029)，利用亲和层析纯 化了脂肪酶 LipTX ，并详细研究了该脂肪酶的酶学性质。采用PCR 技术扩增脂肪酶 LipTX 基因，克隆到载体 pET15b 中，构建重组 载体pET15b-LipTX；将重组载体转入大肠杆菌BL21 （DE3 ）中并利用IPTG 诱导表达目的蛋白，经 70 ℃热处理和Ni-NTA 亲和层析 两步纯化，得到纯化的重组酶。SDS结果表明，脂肪酶 LipTX 分子量为 28 ku。酶学性质研究表明，该酶最适反应温度和pH 分别为 70 ℃和 7.5；通过水解底物特异性和动力学实验，发现LipTX 可以水解不同长链酰基（C8-C12 ）的对硝基苯酚酯底物，对硝基 苯酚癸酸酯是该酶最适合底物；同时该酶能够水解链长在 C4 到 C16 范围的三甘油酯底物，其中以甘油三丁酸酯为底物的酶活力最高。 该酶对非极性有机溶剂（甲醇、乙醇、丙酮、DMF、DMSO 和正己烷和氯仿）和变性剂（SDS、Tween-20 和 TritonX-100 ）具有较强 的抗性，因此在生物催化和有机化学合成中具有广阔的开发应用前景。 关键词：嗜热酶；脂肪酶；克隆；表达；酶学性质 文章篇号：1673-9078(2016)11-91-97 DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2016.11.014 Heterologous Expression and Enzymatic Properties of Lipase LipTX from Thermophilic Bacterium Thermoanaerobacter sp. Strain X514 WEI Tao, YANG Kun-peng, JIA Wei-wei, MAO Duo-bin (School of Food and Biological Engineering, Zhengzhou University of Light Industry, Zhengzhou 450002, China) Abstract: The gene coding for a thermostable lipase LipTX (Teth514_0029) from thermophilic bacterium Thermoanaerobacter sp. strain X514 was cloned and the lipase LipTX was purified using affinity chromatography. The gene coding for lipase LipTX was amplified using polymerase chain reaction (PCR) method, and cloned into a pET15b vector, which was used to construct the recombinant plasmi