反相高效液相法测定莪术油凝胶剂中莪术醇及吉马酮含量.docVIP

反相高效液相法测定莪术油凝胶剂中莪术醇及吉马酮含量 　【摘要】 目的:建立反相-高效液相色谱法(RP-HPLC)测定莪术油凝胶剂中莪术醇和吉马酮的含量的方法。方法:在ODS-C18色谱柱上采用流动相乙睛-0.025 mol/L 磷酸(45:55)(三乙胺调节pH至4.5)溶液进行梯度洗脱：乙腈：0～5 min，70%; 5～30 min，70%→90%；30～50 min，90%。检测波长213 nm，流速1.0 ml/min。结果:在0.3～7μg范围内，莪术醇对照品的峰面积（Y）与其浓度（X）呈现良好的线性关系，r=0.9996，在0.3～7μg范围内，吉马酮对照品的峰面积（Y）与其浓度（X）呈现良好的线性关系，r=0.9997，平均回收率分别为98.37%和99.71%（n=9）。结论:本法专属性高，可同时测定凝胶剂样品中莪术醇和吉马酮的含量，可用于对莪术油凝胶剂的质量控制。 【关键词】 莪术油凝胶 莪术油 高效液相色谱法 莪术醇 吉马酮 含量测定 莪术油(Zedoary Turmeric Oil)是从姜科植物蓬莪术(CurcumaphaeocaulisValeton)、广西莪术(Curcunta kwangsiensis S. G.Lee et C. F. Lung) 温郁金(Curcuma wenyujin Y.H. Chen et C. Ling)的干燥根茎中提取出的挥发油，呈浅黄或棕黄色，具有很强的挥发性[1]。温郁金为姜科姜黄属植物，主产于浙江省温州市瑞安一带，为浙江省道地中药材，人工栽培有千年历史，为著名的“浙八味”之一[2]，其中从温莪术中共提取分离出7个单体化合物，包括三种姜黄素类成分和四种挥发油成分[3]。现选用本地瑞安产莪术油为试样品，对其凝胶剂质量控制作出评价。莪术油葡萄糖注射液剂型作为抗病毒药收载于中国药典2000版二部，其含量测定是以莪术醇为对照品，经香草醛硫酸溶液显色后用比色测定的。莪术油凝胶剂作为一种新的剂型多用于黏膜局部用药，如眼部、阴道等，凝胶剂与传统注射剂相比，具有药物含量增加、滞留时间延长、生物利用度提高的优点。本研究建立了反相HPLC法测定莪术油凝胶剂中莪术醇和吉马酮含量的方法。 1 仪器、试剂及条件 1.1 仪器 UV-7502PC型紫外可见分光光度计(上海欣茂技术有限公司生产）；Agilent 1100高效液相色谱仪（四元泵，检测器VWD）；Agilent Chemstation 色谱工作站；AL204型电子分析天平（梅特勒-托利多公司生产）；18B-C型高速离心机（上海安亭科学仪器厂生产）。 1.2 试剂及药品 乙腈（HPLC级），天津四友生物医学技术有限公司生产；甲醇(HPLC级），天津四友生物医学技术有限公司生产；吉马酮（分子量：206.32，中国药品生物制品检定所提供，批号：（111665-200401）；莪术醇(分子量：236.34, 中国药品生物制品检定所，批号：100185-200405）；莪术油试样品（瑞安天瑞）；莪术油凝胶剂（本院自制，批号为：0603051，0603062，0603093）；其他制剂均为分析纯。 1.3 色谱条件 色谱柱：25 cm×4.6 mm，5μm，Hypersil ODS C18 反相色谱柱，流动相：乙睛-0.025 mo1/L磷酸(45:55)(三乙胺调节pH至4.5)梯度洗脱：乙腈：0～5 min，70%；5～30 min，70%→90%；30～50 min，90%，柱温：25 ℃，流速：1.0 ml/min，检测波长：213 nm，进样量20μl。 2 方法和结果 2.1 系统适应性试验 在1.3的色谱测定条件下，莪术醇与吉马酮峰形对称，保留时间分别约为20 min和26 min，理论塔板数gt;3000，分离度大于4，记录色谱图，结果见图2。 2.2 最低检出量测定 调整检测灵敏度及进样量，测定峰高为基线噪声3倍时的进样量，作为检出限，按该方法测得的最低检测限为10 ng·ml-1，最低检测量为0.2 ng。 　 2.3 标准曲线的制备 精密称取莪术醇对照品10 mg、吉马酮对照品10 mg分别置10 ml容量瓶中，用乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。另取莪术醇对照品溶液和吉马酮对照品溶液各5 ml于25 ml容量瓶中，用乙腈稀释至刻度，得对照品混合溶液。精密量取对照品混合溶液2、3、4、6、10、15、18 ml，分别置25 ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，分别精密注入20μl，记录峰面积，以峰面积对浓度进行回归分析，得莪术醇回归方程为：Y=12765.7035X-34.1235(r=0.9996)，线性范围为0.3～7μg，吉马酮回归方程为：Y=63881.3685X+28.1730(r=0