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题名页 随机聚合酶链反应法检测细菌方法学的建立 张山，李思，王文武 微生物与感染编辑部，上海200032 基金项目：国家高新技术研究发展计划（863）（2009ZZ06…） 第一作者：张山，详细联系方式（电话、E-mail） 通作者：王文武，详细联系方式（电话、E-mail） 随机聚合酶链反应法检测细菌方法学的建立 摘要为证实乙型肝炎病毒（hepatitis B irus，HBV）3022nt-1787nt缺失突变体编码蛋白TSX（源于DNA聚合酶读码框，T代表TP区，S为部分缺失的pacer区，X为截短的X蛋白）具有抗(干扰素（IFN-(）作用并确定其功能区域，首先以PCR）扩增获得TSX全长及片段TS（含TP区及部分缺失的pacer区），并克隆于pcDNA3.1/HisC载体。重组载体以FuGENE6转染Huh7肝细胞，48后裂解细胞，通过融合表达的多肽表位抗体，以estern blot）证实目的蛋白可在Huh7肝细胞中表达。重组载体及空载体pcDNA3.1/HisC分别与IFN-(反应报告载体p6-16CAT按分子数5:1、10:1、15:1、30:1 共转染Huh7肝细胞，转染后48给予终浓度为100 IU/ml 的IFN-(2a刺激，作用24后裂解细胞，ELISA）检测胞内氯霉素乙酰基转移酶CAT）含量结果显示，与空白载体相比，随着TSX及TS重组表达载体转染量的递增，