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垂盆草中总黄酮含量测定 　【摘要】; 目的 建立垂盆草中总黄酮含量的测定方法。方法 采用紫外分光光度法，测定波长为501 nm。结果 总黄酮检测浓度在0.010 36～0.082 88 mg/mL范围内与吸光度线性关系良好(r=0.9998)，平均加样回收率为98.62%(RSD=1.11%，n=6)。结论 本方法用于垂盆草中总黄酮的含量测定，结果准确、可靠、稳定。 【关键词】; 紫外分光光度法；垂盆草；总黄酮；含量测定 　　垂盆草(Sedum sarmentosum Bunge)又称卧茎景天，系景天科多年生草本植物垂盆草的新鲜或干燥的全草，我国大部分地区均有分布。该药味甘、淡、性凉，具有清热解毒、利尿消肿、排脓生肌之效，主治丹毒溃疡，小便不利及急、慢性肝炎等。据有关文献报道，垂盆草中含有氰苷、黄酮类、甾醇类和三萜类等化合物［1，2］。潘金火等［3，4］对垂盆草的保肝降酶活性成分进行了一系列的研究，证明垂盆草中具有保肝降酶作用的活性成分主要存在于H2O部分和nBuOH部分（主要含苷类和总黄酮），进而确认其中的总黄酮是垂盆草中保肝降酶的主要活性组分之一。本文采用经典的比色法对垂盆草中的总黄酮含量进行测定，以为其后继的开发利用提供依据。 　　1; 仪器与试药 　　UV2401型可见紫外分光光度计(日本岛津公司)；bp211D型十万分之一天平(德国赛多利斯公司)；索式提取器等。 　　芦丁对照品(中国药品生物制品检定所,批号:086-9303)；垂盆草(购于安徽省毫州市药材总公司，经南京中医药大学中药鉴定教研室王春根教授鉴定为Sedum sarmentosum Bunge的干燥全草，粉碎至40～60目)；亚硝酸钠、氢氧化钠、硝酸铝、乙醇等为分析纯。 　　2; 方法与结果 　　2.1; 对照品溶液的制备 　　精密称取于120 ℃下减压干燥至恒重的芦丁对照品10.36 mg，置50; mL容量瓶中，加80%（体积分数）乙醇35 mL超声使之完全溶解，冷却至室温，以80%（体积分数）乙醇稀释至刻度，摇匀，得浓度0.2072 mg/mL的芦丁对照品溶液，冷藏，备用。 　　2.2; 供试品溶液的制备 　　精密称取垂盆草药材粉末1.0 g，置索氏提取器中，加石油醚（60～90 ℃）100; mL在85 ℃水浴温度条件下回流提取至无色，弃去石油醚，药渣挥干石油醚，再用80%（体积分数）乙醇100 mL在100 ℃水浴温度条件下回流提取6 h，冷却后，用80%（体积分数）乙醇定容至100 mL,备用。 　　2.3; 定性鉴别反应 　　2.3.1; 氨水反应 　　取样品溶液点于滤纸上，将滤纸在氨水上方熏15 min，立即置紫外光下观察(254 nm)，呈黄绿色荧光斑点。 　　2.3.2; 三氯化铝反应 　　取样品溶液点于滤纸上，滴加5%（质量分数）三氯化铝甲醇溶液，吹干呈灰黄色，在紫外光下(254 nm)观察，呈黄绿色荧光斑点。 　　2.3.3; 盐酸-镁粉反应 　　取样品1 mL，加少许镁粉，再滴加几滴浓盐酸，水浴加热2 min后显红色。 　　2.4; 测定波长的选择 　　精密量取对照品溶液3 mL和供试品溶液5 mL，分别置10 mL容量瓶中，加5%（质量分数）亚硝酸钠溶液0.4 mL，混匀，放置6 min；加10%（质量分数）硝酸铝溶液0.4 mL，放置6过min；加4%（质量分数）氢氧化钠溶液1.0 mL，用80％（体积分数）乙醇定容至刻度，摇匀，放置15 min，以80％（体积分数）乙醇为空白同法配制空白对照液。在400 ～700 nm波长处扫描，对照品与供试品溶液显色后均在501 nm左右波长处有最大吸收，故将501 nm作为测定波长。紫外光谱图见图1。 　　1．供试品;2．芦丁对照品;3．阴性对照 　　图1; 紫外扫描图谱（略） 　　Fig.1 UV Spectrum 　　2.5; 专属性试验 　　取“2.2”项下供试品溶液5 mL,置10 mL容量瓶中，加80%（体积分数）乙醇至刻度，以80%（体积分数）乙醇溶液为空白对照液，在400～700 nm波长处扫描。未经显色的供试品在501 nm左右波长处基本无吸收，说明此显色方法的专属性较强。紫外扫描光谱见图1。 　　　2.6; 标准曲线的绘制 　　分别精密量取对照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0 mL，各置10 mL容量瓶中，分别加80%（体积分数）乙醇至5 mL，加入5%亚硝酸钠溶液0.4 mL，混匀，静置6 min；加入10%（质量分数）硝酸铝溶液0.4 mL，摇匀，静置6 min，加入4%（质量分数）氢氧化钠溶液1.0 mL，再加80%（体积分数）乙醇至刻度，摇匀，放置15 min，以80％（体积分数）乙