紫外-可见分光光度法快速确定细菌液的浓度-中国药品标准.DOCVIP

紫外-可见分光光度法快速确定细菌菌液的浓度 董自艳， 戴翚2 ，马仕洪2 ，胡昌勤2* (1.抚顺市食品药品检验所，抚顺 113006；2.中国食品药品检定研究院，北京 100050) 摘要： 目的：建立快速确定细菌菌液浓度的方法。方法：采用紫外-可见分光光度法和比浊法进行细菌计数，考察两种方法的相关性以及菌液浓度与吸光度之间的相关性。结果：细菌菌液的吸光度与其菌液浓度之间相关性良好，相应菌落计数结果稳定。结论：紫外-可见分光光度计可用于细菌菌液的快速计数。 关键词：紫外-可见分光光度法；比浊法；细菌计数 中图分类号：R921.2文献标识码：A 文章编号： Bacterial Counts by UV-Vis Spectrophotometry Dong Ziyan1, Dai Hui2, Ma Shihong2, Hu Changqin2* (1.Fushun Institute for Food and Drug Control, Fushun 113006; 2.National Institutes for Food and Drug Control, Beijing 100050) Abstract Objective: To establish an UV-Vis Spectrophotometric method for bacterial counts. Methods: UV-Vis spectrophotometry and turbidimetry were used to investigate the correlations between two methods and absorbance with concentration of bacteria counts . Results: The correlation of absorbance with concentration of bacteria was well. The results of bacterial counts were stable. Conclusion: UV-Vis spectrophotometric method is rapid and suitable for bacterial counts. Key Words: UV-Vis spectrophotometry; turbidimetry; bacterial counts 药品微生物实验中，制备标准菌悬液是最基本的工作。目前，菌液浓度常用比浊法和平皿计数法进行测定。但麦氏比浊法所需要的浊度仪在常规实验室中并不普及，标准比浊管在使用中也存在诸多不便；平皿计数法虽结果准确，但操作复杂，所需时间较长，影响大批量检验的进度。《中国药典》中常用的检定菌中细菌有铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌，而枯草芽孢杆菌通过制备孢子悬液的方法可以简化实验操作[1]，本研究针对铜绿假单胞菌、大肠埃希菌和金黄色葡萄球菌计数中的不便，拟建立紫外-可见分光光度计法，对检定菌液进行快速计数，以方便检验工作。 1 仪器与材料 仪器 UV-2550型紫外可见分光光度计(日本岛津公司)；CrystalSpec 比浊仪（美国Becton Dickinson公司）。 1.2培养基与试剂 胰酪胨大豆琼脂培养基(TSA，批号120730)、胰酪胨大豆肉汤培养基(TSB，批号100114)均由北京三药科技开发公司提供。 0.9%氯化钠注射液（批号130504405）由石家庄四药有限公司生产。 1.3菌种 铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa) 〔 CMCC(B) 10 104〕；金黄色葡萄球菌 (Staphylococcus aureus) 〔CMCC(B) 26 003〕 ；大肠埃希菌（Escherichia coli）[〔CMCC(B) 44 102〕。 2 方法与结果2.1菌液制备 接种铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌的新鲜培养物至TSB培养基中，34℃培养24 h。将上述TSB培养物用TSA划线培养，用0.9%氯化钠注射液分别制成麦氏浊度为0.4，0.5，0.6，0.7，0.8的细菌菌液。 2.2菌液吸光度与麦氏浊度的关系 取不同麦氏浊度的菌液，以0.9%氯化钠注射液为空白对照液，照紫外-可见分光光度法（《中国药典》二部附录Ⅳ A），在650 nm波长处测定吸光度，菌液吸光度值与麦氏浊度相关性见图1。结果表明，在0.4~0.8麦氏浊度范围内，大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌菌悬液的麦氏浊度与吸光度存在良好的相关性，但不同菌株的麦氏浊度与吸光度值的斜率不同。 图1 三株试验菌的麦氏浊度与吸光度值的线性结果 2.3菌液