复方丹参方中使药冰片对君药丹参药代动力学影响.docVIP

复方丹参方中使药冰片对君药丹参药代动力学影响 　 作者：郑晓晖，赵欣，房敏峰，王世祥，卫引茂，郑建斌 【摘要】 目的 探讨复方丹参方中使药冰片对君药丹参在新西兰大白兔体内药代动力学过程的影响。方法 丹参组、丹参冰片配伍组水煎液灌胃给药，液液萃取法提取血浆中的丹参素，以对羟基苯甲酸为内标，采用离子阱质谱多级反应模式(MRM)测定兔血浆和脑脊液中丹参素的质量浓度，DAS数据处理软件计算药动学参数。结果 丹参冰片配伍给药可使丹参中丹参素的药动学参数t1/2α、t1/2β、kα、AUC(0-∞)较单独给药时明显增大，丹参素的脑血比提高。结论 复方丹参方中，使药冰片可提高君药丹参中丹参素的生物利用度，减慢代谢，促进血脑屏障对丹参素的通透性。该研究可为“君–使”对药体内作用机制的研究提供思路。 【关键词】 丹参；冰片；药代动力学；“君使”对药 方剂是中药新药研发的基础，其配伍理论及体内作用机制的研究是方剂关键科学问题的基础及要点,也是制约复方最佳化和中药现代化的瓶颈。复方丹参方是活血化瘀、芳香开窍、理气止痛的名方。其临床疗效[1]、体外药效学实验[2]、有效成分的含量测定[3]及药代动力学的研究[47]已有文献报道。王怡等对使药冰片在方剂中的作用进行了初步研究[8]，这对复方丹参方体内作用机制的研究具有积极作用。本研究选择复方丹参方中使药冰片和君药丹参为对象，采用高效液相色谱离子阱质谱法(HPLCMSMS)研究君药丹参与使药冰片配伍前后，丹参中有效成分丹参素在兔体内的药代动力学变化，以探讨君使对药的配伍机制，进而为中药引经理论的研究提供思路和方法。 　　1 材料与方法 　　1.1 药品与试剂 　　丹参、冰片药材(均购于陕西省药材公司，并经陕西省药品检验所鉴定)，丹参素钠对照品(中国药品生物制品检定所提供，批号：110855200304)；内标对羟基苯甲酸(西安化学试剂厂)，甲醇为色谱纯(美国Fisher公司)；实验用水为超纯蒸馏水(自制)；其余试剂均为分析纯。 　　1.2 仪器 　　Agilent 1100高效液相色谱仪(包括在线脱气机、二元梯度泵，7725i手动进样器、柱温箱、二极管阵列检测器)；Agilent 1100 SL型电喷雾离子阱质谱；Anke TGL16G型高速离心机；基因公司Maxima超纯水机；SartoriusBP221s型电子天平(美国Sartorius公司)；BF2000氮气吹干仪；SK1型快速混匀器。 　　1.3 动物 　　新西兰大白兔36只，体重2.0-2.2kg，♀♂各半。由西安交通大学实验动物中心提供，动物合格证号：陕医动字第08018号。 　　1.4 药材供试品溶液的制备 　　取丹参、冰片药材，粉碎，干燥至恒重。称取丹参150g ，以8倍量水浸泡30min，加热回流提取2次，每次1.5h，合并2次提取液，减压抽滤，浓缩至75mL，于4℃冰箱内保存。同法制备丹参(150g)冰片(2.7g)合煎液。 　　1.5 实验设计 　　取新西兰大白兔18只，随机分为3组，每组6只，♀♂各半。丹参组丹参灌胃给药，剂量为10g/kg，配伍组丹参冰片合煎液灌胃给药，丹参给药剂量为10g/kg，冰片给药剂量为0.18g/kg。对照组给予等剂量的丹参后立刻20g/L羧甲基纤维素灌胃。各组分别于给药后10、20、30、45、60、75、90、120、180、300、480、720min耳缘静脉取血1.0mL，测定血浆中丹参素的质量浓度。另取新西兰大白兔18只，随机分为3组，每组6只，♀♂各半。乌拉坦麻醉后，股动脉埋管以备取血；切开颈后部皮肤并分离肌肉以备从小脑延髓池抽取脑脊液，分组及给药方法同上，于给药后20、30、45、60、75min同时取血1.0mL和脑脊液0.3mL，测定血浆和脑脊液中丹参素的质量浓度，并计算脑血比。 　　1.6 分析方法 　　1.6.1 分析条件 　　色谱条件：色谱柱为Agilent TCC18(150mm×4.6mm，5μm)；流动相为甲醇0.2%(体积分数)的甲酸水溶液(10∶90，V∶V)；检测波长为280nm；柱温为25℃；流速为0.8mL/min(柱后分流比3∶1)。质谱条件：电喷雾离子源；正离子检测；喷雾电压3.5kV；干燥气流速8.0L/min；干燥气温度350℃；雾化气压力40.0p.s.i；质量扫描范围50amu-1000amu。 　　1.6.2 生物样品供试品溶液的制备 　　取1.5项下待测生物样品(血浆1.0mL，脑脊液0.3mL)，8000r/min离心10min，取0.25mL上清液，加25μL 0.0021mg/mL对羟基苯甲酸，50μL 10%(体积分数)高氯酸沉淀蛋白，8000r/min离心10min，取上清液，用0.5mL乙酸乙酯萃取