大孔吸附树脂纯化贯叶连翘总黄酮工艺探究.docVIP

大孔吸附树脂纯化贯叶连翘总黄酮工艺探究 　【摘要】 目的 研究大孔吸附树脂分离和纯化贯叶连翘总黄酮的工艺条件。方法 以总黄酮的吸附量和解吸率为考察指标，对4种不同类型的树脂进行评价。结果 AB8型大孔吸附树脂对贯叶连翘中总黄酮具有较好的分离能力。结论 采用本法分离纯化贯叶连翘总黄酮简单可行。 【关键词】 贯叶连翘； 总黄酮； 大孔吸附树脂； 纯化 【Abstract】 Objective To obtain the optimal conditions for separating the flavonoids from the extract of Hypericum perforactum L. by selecting appropriate macroporous absorption resins..Methods Separating efficiency of four types of macroporous absorption were evaluated by measuring the absorption ratio and eluting ratio of flavonoids. Results The AB8 macroporous absorption resin had better separating efficiency. Conclusion This method is simple,feasible and suitable for industry production. 【Key words】 Hypericum perforactum L.；flavonoids；macroporous absorption resin; purification 贯叶连翘（Hypericum perforatum）属金丝桃属藤黄科多年生草本植物，全草可入药。这种野生植物的全草或带根全草有药用价值。贯叶连翘具有清热解毒、收敛止血、利湿等功效，主要用于止血、抗炎、治疗妇科病等。目前，用贯叶连翘提取物制成的制剂已在欧美大量上市，用于治疗抑郁症、甲型和乙型肝炎及艾滋病等。此外，还有文献报道其有抗肿瘤活性。贯叶连翘含有多种具有生物活性的化学成分，不同成分具有不同的药用价值，成分相互之间发挥协同作用从而用于不同疾病的治疗。因此，分离纯化贯叶连翘总黄酮具有重要意义。 大孔树脂物理化学稳定性高、比表面积大、吸附容量大、选择性好、吸附速度快、解吸条件温和、再生处理方便、使用周期长，现已广泛应用于天然产物的分离和富集。但大孔吸附树脂型号很多，性能用途各异，因此本文特选了四种不同型号的大孔树脂，从中筛选出分离纯化效果最好的树脂种类。 1 试药 贯叶连翘（购于五块石中药材市场）；AB8、 D101、 NKA、 D4020大孔吸附树脂，其余试剂均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 总黄酮含量的测定 2.1.1 最大吸收波长的选择 精密量取标准品溶液各1 ml分别置25 ml容量瓶中,其余操作均同标准曲线制备，在紫外可见光分光光度计下400～700 nm 处扫描，标准品最大吸收波长511.3 nm，样品液最大吸收波长为510.5 nm，综合上述实验拟定510 nm为检测波长。 2.1.2 标准曲线的绘制 精密量取在120℃干燥至恒重的芦丁标准品12.5 mg置25 ml量瓶中，加一定浓度的甲醇适量，超声30 min使溶解，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，准确吸取20 ml置于25 ml容量瓶中，加水至刻度，即得0.4 mg/ml 的标准品溶液。精密量取上述芦丁标准品溶液0 ml、 1 ml、 2 ml、 3 ml、 4 ml、 5 ml、 6 ml分别于7支50 ml容量瓶中，编号，各加水至6 ml，加入1ml 5% 亚硝酸钠溶液，摇匀，静置6 min，加入1 ml 10% Al(NO3)3 溶液，摇匀，放置6 min，后加入4.3%的NaOH溶液10 ml，再加水至刻度，摇匀，放置15 min，以0号容量瓶为空白试剂，照紫外可见分光光度法（《中国药典》2005年版一部附录VA），在波长510nm处测定吸光度（结果见表1）。表1 各样品液吸光度表以吸光度A和浓度C进行回归，得线性回归方程为：C= 0.093 0A+0.000 2，r=0.999 83，线性范围0.008 mg/ml～0.048 mg/ml. 2.2 样品溶液的制备 药材的取样：因为贯叶连翘是全草入药，且在各个部位的总黄酮的含量不一致，为使取样均一性且保证其全草入药，故将其分为枝和叶两部分分别粉碎干燥，混匀后称取，以消除取样带来的误差。 　　贯叶连翘中黄酮的提取：选用4种方法提取贯叶连翘中的黄酮，分别是：乙醇回流提取法