大肠埃希菌连续分离株耐药表型及复方磺胺甲口恶唑耐药相关基因研.docVIP

大肠埃希菌连续分离株耐药表型及复方磺胺甲口恶唑耐药相关基因研 　 作者：王伟 糜祖煌 毛剑锋 徐伟珍 【摘要】 目的 了解临床分离的大肠埃希菌耐药性和复方磺胺甲口恶唑(SMZ/TMP)耐药相关基因存在状况。方法 测定临床连续分离的60株大肠埃希菌对19种抗菌药物的敏感性，采用聚合酶链反应(PCR)检测SMZ/TMP耐药相关基因(sul1、dfrA1、dfrA17)。结果 60株中sul1、dfrA1、dfrA17基因阳性分别为34株(56.7%)、1株(1.7%)、35株(58.3%)。结论 临床分离的大肠埃希菌多重耐药严重；复方磺胺甲口恶唑耐药相关基因携带率高。 【关键词】 大肠埃希菌； 复方磺胺甲口恶唑； 耐药基因 ABSTRACT Objective To investigate the drug resistance and drug resistancerelated trimethoprimsulfamethoxazole genes in Excherichia coli. Method Microdilution tests were performed to detect susceptibility of 60 strains of Escherichia coli to 19 antimicrobial agents and drug resistancerelated trimethoprimsulfamethoxazole were detected by PCR. Result The positive rates of sul1, dfrA1 and dfrA17 genes in 60 clinical strains of Escherichia coli were 56.7%, 1.7%, 58.3%, respectively. Conclusions There are multipledrug resistance and high positive rate of drug resistancerelated trimethoprimsulfamethoxazde genes in Escherichia coli isolated from the hospital. KEY WORDS Escherichia coli; Trimethoprimsulfamethoxazole; Resistant genes 多年来，大肠埃希菌(Escherichia coli，EC)一直是医院感染的重要病原菌之一。EC菌对β内酰胺类和氨基糖苷类在内的常用抗菌药物出现多重耐药性，相关耐药基因研究已有报道。经检索国内尚无EC菌的复方磺胺甲口恶唑(SMZ/TMP)耐药相关基因报道。我们对60株连续分离株EC菌进行了药敏表型检测，并进行了SMZ/TMP耐药相关基因sul1、dfrA1、dfrA17检测，现报道如下。 1 材料与方法 1.1 菌株来源 60株EC菌均分离自2006年08月～2006年12月间丽水市人民医院住院患者临床标本，其中痰液10例，尿液24例，血液2例，分泌物24例(脓液15例、腹水4例、引流液3例、咽拭子2例)。全部菌株用BioMerieux ATB细菌鉴定仪鉴定菌种。标准菌株为大肠埃希菌ATCC25922和铜绿假单胞菌ATCC27853。 1.2 抗菌药物敏感性试验 用微量肉汤稀释法测定19种抗菌药物的敏感性，并根据美国CLSI 2006年版要求进行敏感性判断。 1.3 细菌处理 挑纯培养菌落置入0.5ml离心管内(内预置200ng/ml蛋白酶K溶液200μl)，56℃水浴2h，然后95℃水浴10min，加入Chelex 100树酯40μl，离心(15000r/min)30s。上清液即为基因检测的模板液，-20℃冰箱保存备用。 1.4 基因检测 用聚合酶链反应法(PCR)进行检测。PCR引物序列见表1。PCR扩增体系为：每反应体系P1、P2引物各0.5μmol，dNTPs各200mmol，KCl 10mmol，(NH4)2SO4 8mmol，MgCl2 2mmol，TrisHCl(pH9.0) 10mmol，NP40 0.5%，BSA 0.02%(wt/vol)，Taq DNA pol 1U；总反应体积20μl(其中模板液5μl)。热循环参数为：93℃预变性2min，然后93℃30s→55℃30s→72℃60s，循环35周期，再72℃延伸5min。耐药基因检测试剂盒、靶基因PCR引物序列和阳性对照DNA由无锡市克隆遗传技术研究所提供(表1)。扩增产物经2%琼脂糖凝胶电泳，紫外凝胶电泳成像仪下观察，并纪录结果。表1 sul1、dfrA