小儿急性淋巴细胞白血病及HLA基因多态性相关性探究.docVIP

小儿急性淋巴细胞白血病及HLA基因多态性相关性探究 　【摘要】 目的: 对小儿急性淋巴细胞白血病患者进行HLA基因多态性分型, 寻找急性淋巴细胞白血病的易感基因。方法: 采用特异性寡核苷酸探针杂交（PCR/SSO）法, 对儿童急性淋巴细胞白血病患者和健康对照组进行HLAA、 B、 DRB1基因分型。结果: 在儿童急性淋巴细胞白血病患者中 HLAA01、 A02、 HLADRB1*01、 HLADRB1*15基因位点较对照组明显升高（Plt;0.05）。A11、 A33、 HLADRB1*03基因位点频率较对照组降低（Plt;0.05）。其中HLAA01、 HLADRB1*01、 HLADRB1*15基因位点相对危险率RRgt;4, 而A11、 A33、 HLADRB1*03基因位点相对危险率RRlt;1。结论: HLAA01、 A02、 A33、 HLADRB1*01、 DRB1*03、 DRB1*15与小儿急性淋巴细胞白血病有相关性。其中HLAA01、 HLADRB1*01、 HLADRB1*15对儿童白血病有遗传易感性。A11、 A33、 HLADRB1*03则对青海地区汉族小儿急性淋巴细胞白血病的发生有拮抗作用。 【关键词】 HLA 急性淋巴细胞白血病 相关性 SSO/PCR 　　不同患者对白血病的易感性及免疫功能不尽相同［1］。具有高度多态性并与抗原提呈和识别有关的人类白细胞抗原（HLA）分子, 可能是导致白血病的重要遗传因素之一［2］。采用SSO/PCR（序列特异性寡核苷酸探针）的方法对青海地区汉族38例小儿急性淋巴细胞白血病患者和35例健康对照进行了HLA基因分型, 探讨HLA与白血病的相关性。 　　1 材料和方法 　　1.1 材料 DNA提取试剂盒购自QIAGEN公司; HLA分型试剂盒为英国Dymal RELITMSSO产品。我院自2002～2005年收住的青海地区汉族小儿急性淋巴细胞白血病患者38例, 按FBA诊断标准确诊, 年龄在2～15岁, 平均年龄6岁。其中男21例、 女17例。按照随机原则, 抽取与白血病患者无亲属关系的35例志愿者为对照组。白血病患者和对照组均抽取外周血4 mL经EDTA抗凝。放置-20℃冰箱备用。 　　1.2 方法 　　1.2.1 基因组DNA的提取 采用DNA提取试剂盒, 从全血中提取基因组DNA。严格按照说明书进行操作用紫外分光光度计测定DNA溶液的纯度, 当A260/280值在1.6～1.8时, 表明DNA纯度较高, 放置于-20℃冰箱备用。 　　1.2.2 等位基因HLAA、 B及DRB1分型 采用PCRSSO方法, 用HLA分型试剂盒。分别用不同的引物, 对具有高度多态性的HLAA、 B位点的第2、 第3外显子和DR位点的第2外显子上的DRB1、 DRB3、 DRB4及DRB5基因进行扩增, 将扩增产物变性使其成为单链, 加入到含有序列特异性寡核苷酸探针的尼龙薄膜上, 使生物素标记的扩增产物与膜上的探针结合, 通过链霉亲和素-辣根过氧化物酶与其反应, 再用H2O2, 和四甲基联苯胺显色后, 记录探针杂交的情况。通过相应的分析软件, 得出该样本的HLA基因型别, 具体操作方法参照http://www.tissue(Dynal RELITM SSO HLA test)。 　　1.2.3 统计学分析 HLA各位点的基因频数用直接记数法, 基因频数=各位点的阳性数/本组出现的基因总数。根据数据特点采用四格表χ2检验, 经 SPSS11.0统计软件进行统计处理。Plt;0.05时计算该位点与疾病发生的相对危险率。相对危险率(RR)=P+×C-/P-×C+, 式中P+为患者组具有某种基因的位点数, C-为对照组不带此基因的基因位点数。P-为患者组不具有某种基因的位点数, C+对照组带此基因的基因位点数。若RR值gt;4, 则认为该位点是疾病发生的危险因素; 若RRlt;1, 则认为该位点在疾病发生过程中起保护性作用。1 　　2 结果 　　2.1 等位基因HLAA基因频率的比较 HLAA基因共出现11个位点, 基因频率见表1一在35例正常对照组的HLAA等位基因中, A11、 A30及A33等位基因的频率较高; 而A01、 A02、 A23等位基因的频率较低, 在38例白血病患者的HLAA等位基因中, A01、 A02、 A24等位基因的频率较高; 而A11、 A23、 A33及A34等位基因的频率较低 其中A01、 A02等位基因的频率明显高于正常对照组(Plt;0．05); A11、 A33等位基因的频率明显低于正常对照组(Plt;0.05), 其他组别差异无统计学意义。