应用DNA微阵列技术探究三氧化二砷对RPMI 8226细胞作用.doc

应用DNA微阵列技术探究三氧化二砷对RPMI 8226细胞作用 　 作者：王梦昌，刘陕西，刘蓬勃 【关键词】 三氧化二砷 ［摘要］ 目的：应用cDNA芯片技术研究三氧化二砷对多发性骨髓瘤细胞株RPMI 8226的作用。方法：采用包含4 096个人类基因的cDNA表达谱芯片，检测三氧化二砷作用于RPMI 8226细胞24 h前后其基因表达的变化。结果：在mRNA水平上，273个基因的表达发生了明显改变，其中121个基因表达上调，152个基因表达下调。结论：三氧化二砷可引起RPMI 8226细胞株一系列基因表达的改变。ZFYVE16、TXNIP及ALK1基因可能与RPMI 8226细胞的分化与凋亡密切相关。 　　［关键词］ 三氧化二砷; DNA微阵列; 多发性骨髓瘤 　　Changes of gene expression profile of multiple myeloma cell line RPMI 8226 treated by arsenic trioxide 　　ABSTRACT Objective: To compare the changes of gene expression profiles of multiple myeloma cell line RPMI 8226 before and after 24hour intervention of arsenic trioxide. Methods: The responses of the RPMI 8226 cells to arsenic trioxide were determined with cDNA microarray which included 4 096 different human genes. Results: Of these 4 096 genes, the expressions of 273 genes were altered significantly at mRNA level. The expressions of 121 genes were upregulated while the expressions of 152 genes were downregulated. Conclusion: The effect of arsenic trioxide on RPMI 8226 cells is related to changing the expression levels of a number of genes. ZFYVE16, ALK1 and TXNIP genes may play important roles in apoptosis and differentiation of RPMI 8226 cells. 　　KEY WORDS arsenic trioxide; DNA microarray; multiple myeloma 　　多发性骨髓瘤（multiple myeloma, MM）是一种浆细胞恶性增殖性疾病。由于MM瘤细胞的增殖比例很低及多药耐药的形成，目前临床治疗该病仍十分困难，迄今为止尚无根治的方法。最近的临床资料显示，三氧化二砷对MM有一定的治疗效果，且无严重的毒副作用［1,2］。为探寻三氧化二砷治疗MM的作用机制，本实验应用DNA微阵列技术研究三氧化二砷作用于MM细胞株后对其基因网络的调控作用。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 （1）三氧化二砷，购自中国药品公司，样品溶于RPMI 1640培养基（美国Gibco公司产品），灭菌分装备用，存储浓度为35 mg/L，使用时稀释为工作浓度2 μmol/L。（2）RPMI 8226细胞，为人类MM细胞株，由西安交通大学第一医院血液中心提供。 　　1.2 细胞培养 取RPMI 8226细胞按1×105/ml浓度分别接种于含及不含2 μmol/L三氧化二砷的新鲜RPMI 1640培养基中（内含10%小牛血清、1 mmol/L谷氨酰胺、1 mmol/L丙酮酸、100 U/ml青霉素、100 U/ml链霉素），于37 ℃、5% CO2培养箱中培养24 h后收集细胞。 　　1.3 总RNA的提取 按照TRIzol Reagent（美国Gibco公司产品）说明书进行操作，提取RPMI 8226细胞总RNA，采用Oligotex mRNA Midi Kit（荷兰QIAGEN公司产品）纯化mRNA，应用RNA电泳及分光光度仪测定光密度（optic density, OD）值，计算OD260/OD280值以鉴定mRNA质量。 　　1.4 探针标记 按美国Biostar公司芯片杂交试剂盒说明书操作。分别等量混合未使用三氧化二砷干预