归脾汤对抑郁模型大鼠血清雌二醇、皮质酮及海马形态学影响.doc

归脾汤对抑郁模型大鼠血清雌二醇、皮质酮及海马形态学影响 　【摘要】 目的：观察归脾汤对抑郁模型大鼠血清皮质酮、雌二醇(E2)水平和海马形态学的影响，初步探讨其防治抑郁症的可能机制。方法：40只Wistar雌性大鼠分为空白组、模型组、对照组、中药组。应用慢性不可预见性中等强度刺激复制抑郁症动物模型。Openfield法检测大鼠行为学得分，放免法测定皮质酮及E2含量,HE染色和扫描电镜观察海马形态学变化。结果：与空白比较，模型组和对照组大鼠的体重、行为学得分、血清皮质酮、E2、FSH、LH含量均有显著性差异，海马损伤明显，而中药组上述指标均无明显差异。结论：归脾汤的抗抑郁机制与其维持正常的皮质酮、E2分泌和海马形态有关。 【关键词】 抑郁症;归脾汤/药效学;雌二醇(E2);皮质酮;海马;大鼠 抑郁症是常见的情感障碍，女性多发。目前认为海马损伤是抑郁症发病的重要环节。众多研究发现皮质醇是引起海马损伤的主要因素，雌激素则能够保护海马，因此对于女性患者来说，维持正常的皮质醇和雌激素分泌具有重要意义。临床实践表明，归脾汤治疗抑郁症效果明显［12］，但其作用机制尚不清楚。本实验主要从内分泌方面研究归脾汤对海马形态学的影响，初步探讨其抗抑郁机制。 1 材料和方法 1.1 实验动物的选取和分组 健康Wistar雌性大鼠，清洁级，体重(220±20) g，由中国医科大学实验动物中心提供。经适应性饲养1周后,选择体重和行为学评分相近的40只大鼠，随机分为空白组、抑郁症模型组(模型组)、抑郁症模型＋对照组和抑郁症模型＋归脾汤组(中药组)，每组10只， 每笼5只饲养。室温20℃-25℃，湿度40%-50%。 1.2 抑郁症模型的建立 除对照组，其余3组动物均复制慢性不可预见性应激模型［3］：大鼠在21 d内每天接受一种刺激，包括电击足底(36 V交流电，5 min)、冰水游泳(4℃，5 min)、摇晃(1 min)、夹尾(1 min)、禁水(24 h)、禁食(24 h)等，每种刺激使用3-4次。 1.3 给药方法 空白组不给药;模型组只施加灌胃动作但不给药；对照组灌服2 mL生理盐水；中药组灌服归脾汤。归脾汤组成：白术30 g，茯苓30 g，黄芪30 g，龙眼肉30 g，酸枣仁30 g，人参15 g，木香15 g，甘草8 g，当归3 g，远志3 g，购于辽宁中医药大学附属医院药局。按常规方法煎煮，浓缩至2 g/mL，4℃冰箱保存备用。根据临床成人用量折算成大鼠灌胃剂量，每天给药1 mL/100g，于每次刺激前0.5 h灌服，共给药21 d。 1.4 大鼠体重和行为学检测 于实验的第1天和第22天的9点开始，采用GS671电子秤(大连星海生物有限公司)按动物序号进行测量体重。之后可采用openfield法检测行为学得分，计数3 min内大鼠的水平活动得分和垂直活动得分。检测过程中保证时间、光照、温度及环境噪音的一致性。 1.5 大鼠血清皮质酮、E2、FSH、LH水平检测 在实验的第22天，1.4任务完成后，大鼠经20%乌拉坦(0.4 mL/100 g)麻醉，腹主动脉取血2 mL，离心取血清，低温冷藏备用。采用放免法检测血清皮质酮、雌激素浓度，此项工作由沈阳军区总医院内分泌实验室协助完成。 1.6 海马形态学观察 1.5后每组取5只大鼠，升主动脉注射生理盐水清洗脑组织后，立即断头取双侧海马，置于10%甲醛中固定，石蜡切片，HE染色，光镜下观察海马CA3区神经元形态的变化。此项工作于辽宁中医药大学病理实验室完成。再取5只大鼠，经升主动脉150 mL生理盐水快速冲去血液后，再快速灌入4℃2.5%戊二醛固定液。取双侧海马，修块，置于戊二醛中固定2 h，PBS反复清洗后，再经1%锇酸固定2 h，双蒸水冲洗，梯度乙醇脱水，临界点干燥，离子溅射真空渡膜，扫描电镜下观察并拍照。此项工作由辽宁中医药大学电镜室完成。 1.7 数据处理 数据以(±s)形式表示，采用SPSS 10.0统计软件处理，统计方法采用ANOVA法、单因素方差分析和两两比较。 2 结果 2.1 各组大鼠体重的变化 见表1。表1 各组大鼠体重变化表1显示，第22天模型组和对照组大鼠体重较空白组显著下降(P＜0.05)，中药组则变化不大。 2.2 各组大鼠的行为学得分 见表2。 表2 各组大鼠行为学得分(n=10,次/3 min) 组 别水平垂直第1天第22天第1天第22天空白组49.3±9.046.2±8.711.6±3.411.1±3.0模型组50.4±9.030.3±9.2△11.3±3.24.9±2.1△对照组50.3±7.527.3±7.8△11.8±3.35.1±2.4△中药组51.1±7.649.6±8.711.4±3.111.0±2.7 注：与空白组比较