忍冬藤叶中绿原酸分离纯化工艺探究.doc

忍冬藤叶中绿原酸分离纯化工艺探究 　【摘要】 目的研究忍冬藤叶中的绿原酸分离纯化工艺。方法用静态吸附法考察不同大孔树脂的吸附、解吸性能，并以绿原酸保留率为指标，采用L9(34)正交实验设计对忍冬藤叶中绿原酸的分离纯化工艺条件进行优化。结果综合考虑，最佳大孔树脂为LSA-21，溶媒浓度为25％，溶媒为2BV，洗脱流速为0.6BV·h-1。结论该工艺合理，稳定可行，可用于工业化推广。 【关键词】 忍冬藤叶； 分离纯化工艺； 大孔吸附树脂； 正交实验设计； 绿原酸 Abstract：ObjectiveTo study the purification of Chlorogenic acid in twig and leaf Lonicera Japonica Thunb. MethodsThe different macroporous resin properties of absorption and desorption were observed by static absorption method. With the reservation rate of chlorogenic acid as indexes．orthogonal design with L9(34) was used to select the condition of purification. ResultsThe macroporous resin of LSA-21 had the best performance,and the optimum conditions as follows：25％ alcohol and 2 BV amount of solution，the flow rate was 0.6 BV·h-1.ConclusionThe condition of purification is stable and practicable, it can be used for the preparation in large scale． Key words：Lonicera japonica Thunb.； Purification; Macroporous resin； Orthogonal design; Chlorogenic acid 绿原酸是植物在有氧呼吸过程中经莽草酸途径形成的一种苯丙素类化合物，属酚酸类化合物，具有抗菌、抗病毒、升高白细胞、保肝利胆、抗肿瘤、降血压、降血脂等作用［1］，是金银花、忍冬藤叶的主要有效成分之一。因以金银花为原料提取绿原酸的生产成本较高，而与花同株的忍冬藤叶中绿原酸含量与花相近，所以从忍冬藤叶中提取分离绿原酸具有显著经济意义。本实验在研究忍冬藤叶中绿原酸提取工艺的基础上对分离纯化工艺进行优选。 1 仪器与材料 1.1 仪器 岛津LC-10ATvp高效液相色谱仪（岛津公司）；N2000色谱数据工作站（浙江大学智能信息工程研究所）；DZF-6021型真空干燥箱（上海一恒）；METTLER-TOLEDD AB265-S型 电子分析天平(瑞士)。 1.2 材料 忍冬藤叶，批号070822，江西中医药高等专科学校附属中药饮片厂提供；AB-8，HPD-100A，HPD-400A，HPD-826A，LSA-21，LSA-80等大孔吸附树脂，分别购自天津大学化工厂，沧州宝恩化工有限公司，西安蓝深有限公司；绿原酸对照品，批号110753-200212，购自中国药品生物制品检定所；试剂除HPLC用乙腈为色谱纯外，其他均为分析纯。 2 方法与结果 2.1 含量测定 2.1.1 色谱条件［2］ 色谱柱为hypersil ODS2柱（5μm，4.6 mm×250 mm;大连依利特）；柱温35℃；流动相为乙腈-0.4％磷酸（13∶87）；检测波长327 nm；流速1.0 ml·min-1；理论塔板数按绿原酸峰计算应不低于1 000。 2.1.2 对照品溶液的制备 精密称取绿原酸对照品17.80 mg，置25 ml 棕色量瓶中，加50%甲醇溶液溶解并稀释至刻度，摇匀；精密量取1 ml ，置10 ml 棕色量瓶中加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，贮存于棕色量瓶并置4℃冰箱，备用。 2.1.3 标准曲线的绘制 分别精密量取绿原酸对照品溶液1，2，3，4，5，6 ml置10 ml容量瓶中，加50％甲醇稀释至刻度，依次精密吸取20 μl注入液相色谱仪，记录色谱图。以进样量（X）对峰面积A作线性回归，回归方程为：A=1.565 9×106X+8 319.3,r=0.999 9，可知绿原酸在0.223 6～1.341 6 μg范围内与峰面积呈良好线性关系。 2.1.4 原药材含量测定 取样品适量，粉碎成