悦肝胶囊对酒精中毒小鼠肝脏保护作用组化及生化探究.doc

悦肝胶囊对酒精中毒小鼠肝脏保护作用组化及生化探究 　 作者：朴丽花， 金政， 蔡英兰， 李善花 【关键词】 悦肝胶囊；,,酒精性肝损伤；,,组织化学；,,生物化学 　　　摘要：目的： 研究 悦肝胶囊对酒精性肝损伤小鼠肝脏的保护作用。 方法 ：KM种小鼠随机分正常组、模型组(56度二锅头白酒14 ml#12539;kg-1#12539;d-1)、东宝肝泰组(0.8 g#12539;kg-1#12539;d-1，56度二锅头白酒14 ml#12539;kg-1#12539;d-1)、悦肝胶囊大剂量组(10 g#12539;kg-1#12539;d-1，56度二锅头白酒14 ml#12539;kg-1#12539;d-1)、悦肝胶囊中剂量组(5 g#12539;kg-1#12539;d-1，56度二锅头白酒14 m1#12539;kg-1#12539;d-1)、悦肝胶囊小剂量组(2.5 g#12539;kg-1#12539;d-1，56度二锅头白酒14 ml#12539;kg-1#12539;d-1)、连续灌胃6周,眼球采血，进行生化测定丙氨酸转移酶(ALT)、甘油三酯(TG)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)；取出肝左叶按组织化学方法观察琥珀酸脱氢酶(SDH)、酸性磷酸酶(ACP)活性，油红O法显示中性脂肪。结果：悦肝胶囊可明显抑制ALT活性巴(P＜0.05)，降低TG、MDA含量(P＜0.05)，提高SOD活性(P＜0.05)；组织化学观察表明，损伤组SDH活性下降，ACP活性增高，脂滴增多。悦肝胶囊可减轻上述肝损伤程度。结论：悦肝胶囊对酒精中毒小鼠肝脏损伤有一定的防治作用。 　　关键词：悦肝胶囊； 酒精性肝损伤； 组织化学； 生物化学 　　据 文献 报道［1］,酒精性肝病的发病率与酒精消耗平行,饮酒量越大其发病率越高，酒精中毒对肝脏的损害较其它组织、器官更严重，悦肝胶囊主要由葛根、丹参、西洋参、麦冬等中药组成。临床资料表明此方具有改善肝炎患者症状、恢复肝功能、调节免疫功能的作用。为探讨悦肝胶囊的作用机理本实验观察了悦肝胶囊对酒精所致的肝损伤小鼠血清氧自由基相关指标及其对肝细胞酶活性变化的 影响 。 毕业论文 　　1 材料和方法 　　1.1 实验动物KM种雄性小鼠，体重为（20±2）g，延边大学医学院实验动物科提供，于室温18～20 ℃普通饲料喂养，自由摄食、饮水。动物合格证：SCXK2002-2005。 论文代写 　　1.2 药物与试剂悦肝胶囊由延边大学长白山天然药物研究中心提供。制备方法：葛根30 g,丹参30 g,麦冬20 g,西洋参20 g,加蒸馏水煮1 h后过滤，滤出液备用，把原药再煮1 h后过滤，把第1次滤出液和第2次滤出液混合，浓缩成100 ml即得。实验用酒为北京二锅头酒厂生产的56度二锅头白酒。东宝肝泰为 中国 通化东宝药业股份有限公司产品。ALT，TG试剂盒为中生北控生物 科技 有限公司产品。SOD，MDA试剂盒为南京建成生物工程研究所产品。 　　1.3 主要仪器日本OLYMPUS万能显微镜，芬兰MK-3酶标仪，德国ZKl5超低温高速离心机，北京天地百年科技有限公司TD一2000真彩色病理细胞显微 分析 系统，美国Starlet221恒冷箱切片机。 　　1.4 方法将60只KM种小鼠随机分为正常组、酒精损伤组、东宝肝泰组、悦肝胶囊大剂量组、悦肝胶囊中剂量组、悦肝胶囊小剂量组。药物对照组给予0.8 g/kg体重东宝肝泰，药物组分别给予10，5，2.5 g/kg 体重悦肝胶囊，正常组、模型组以等体积生理盐水灌胃，30 min 后除正常组外其余组均给予56度二锅头白酒14 ml/kg体重灌胃。小鼠连续灌胃6周，于末次灌胃24h ，眼球采血，分离血清，用酶标仪测SOD活性和MDA含量；快速断头处死小鼠，取出肝左叶进行组织化学观察。 论文代写 　　1.5 观察指标ALT活性采用赖氏法；TG含量按酶比色法；血清SOD活性按黄嘌呤氧化酶法；MDA含量按硫代巴比妥酸法。 肝组织冰冻切片，切片厚约8 μm，进行组织化学染色。亚铁氰化钾法显示琥珀酸脱氢酶，Gomori法显示酸性磷酸酶活性，油红O法显示中性脂肪，在万能相差显微镜下观察并拍片。 　　1.6 统计学方法所有数据以±s表示， 应用 SPSS10.0统计软件进行方差分析。 　　2 结果 　　2.1 组织化学 论文代写 　　2.1.1 琥珀酸脱氢酶(SDH)染色结果SDH活性在光镜下显示为紫蓝色颗粒。正常组SDH活性强，颗粒多，染色深。模型组SDH活性减弱，紫蓝色颗粒减少，染色浅。药物对照组及药物组SDH活性均较模型组增强，颗粒多，染色深。 毕业论文 　　2.1.2 酸性磷酸酶(A