慢性肾衰患者瘦素基因表达及蛋白表达及高瘦素血症相关病因探究.doc

慢性肾衰患者瘦素基因表达及蛋白表达及高瘦素血症相关病因探究 　【摘要】 目的：探讨慢性肾衰患者高瘦素血症与瘦素基因表达及蛋白表达、肾小球滤过率、体质指数及炎症、空腹胰岛素之间的相关性. 方法：检测150例分别处于不同慢性肾功能衰竭阶段患者的血清瘦素水平、肾小球滤过率、同型半胱氨酸、C反应蛋白、空腹胰岛素的，并计算其体质指数. RTPCR法检测15例终末期肾衰患者腹部脂肪组织瘦素基因表达；免疫组化法检测其瘦素蛋白表达. 结果：肾功能损伤患者血清平均瘦素水平明显高于健康对照组（Plt;0.01），与体质量指数之间呈正相关(Plt;0.01)，与肾小球滤过率呈负相关（Plt;0.01）. 相关性分析发现血清瘦素与C反应蛋白、同型半胱氨酸及空腹胰岛素之间呈正相关（P均lt;0.05）. 终末期肾功能衰竭患者脂肪组织瘦素mRNA表达水平低于健康对照组（Plt;0.01），而蛋白表达高于健康对照组（Plt;0.01）. 血清瘦素水平与瘦素基因表达水平呈负相关(Plt;0.05). 结论：慢性肾衰患者血清瘦素水平的升高与肾小球滤过率下降所导致的瘦素清除减少有关;终末期肾衰患者脂肪组织瘦素蛋白表达水平升高可能与慢性肾衰高瘦素血症有关. 【关键词】 瘦素；基因表达；肾功能衰竭,慢性；炎症；肾小球滤过率 　　0引言 　　瘦素(leptin)是由瘦素基因编码的肽类激素，与啮齿类动物及人类的食欲和能量代谢有关. 高浓度的瘦素可使食欲下降和能量消耗增加. 尿毒症患者广泛存在食欲下降和营养不良，但肾脏替代治疗不能完全改善上述状况，有研究认为这与高瘦素血症有关,而高瘦素血症可能与肾小球滤过率（glomerular filtration rate，GFR）下降， 炎症， 高胰岛素血症有关［1］， 但尿毒症患者血清瘦素水平增加的真正原因却仍在探讨之中. 本研究旨在通过对慢性肾衰（chronic renal failure, CRF）患者血中瘦素水平及瘦素基因表达的变化进行研究， 同时寻找引起这些变化的原因. 　　1材料和方法 　　1.1材料 　　150例患者中男89例，女61例， 均有不同程度肾损伤. 男性年龄（42±1）岁， 女性年龄（45±2）岁，其中原发性肾小球肾炎112例，慢性肾盂肾炎7例，多囊肾9例，糖尿病肾病17例，系统性红斑狼疮5例. 所有患者观察期间均停止使用类固醇及男性激素. GFRlt;10 mL/min的患者采用血液透析治疗，2~3次/wk，4 h/次，碳酸盐透析液，血流量200~250 mL/min，透析液流量500 mL/min. 建议患者每日进食蛋白量为1.0 g/kg,蛋白摄入量由尿素动力学控制，不控制日常能量摄入. 30例健康自愿者作为健康对照组，男17例，女13例，年龄（44±1）岁，体质量指数相匹配. 　　1.2方法 　　①取血当日测量身长、体质量,计算体质量指数（body mass index，BMI）(BMI=体质量÷身长2)，所有测量均由一人完成. ②在控制条件下，留24 h尿，于次日清晨空腹状态下采静脉血2 mL，在本院生化检验室检测内生肌酐清除率. ③于清晨空腹状态下采静脉血4 mL，血液透析患者透析前采血，取血后立即分离血清，置于-70℃冰箱中保存，待标本集齐后一次检测，检测血清瘦素浓度应用放射免疫分析法，试剂盒购于美国DSL公司. 一抗为兔抗人整分子瘦素的特异性多克隆抗血清，二抗为羊抗兔IgG血清. ELISA方法检测血清C反应蛋白（Creactive protein，CRP）（试剂盒购于美国Biochech公司）. 荧光偏振免疫分析法检测血清同型半光胺酸（total homocystein，tHcy）（试剂盒及荧光偏振免疫分析仪均为美国ABBOTT公司产品）. IMMVLITE180化学发光仪检测血清空腹胰岛素水平（fasting insulin，FINS）. ④脂肪组织的获取：被测者禁食8h，15例维持性血液透析的终末期肾衰（endstage renal disease，ESRD）患者，男8例，年龄（42.5±5.7）岁，女7例，年龄（38.7±7.8）岁,均在进行肾移植手术切开腹部皮肤时取腹部脂肪2 cm3, 15例对照组均为腹腔镜下行胆囊切除术患者，BMI与15例ESRD患者相匹配，在手术时取腹部皮下脂肪2 cm3，脂肪组织立即液氮运送，-80℃保存待测. 另各取脂肪组织0.5 cm3,福尔马林固定，脱水后石蜡封存，待行免疫组化检测. ⑤瘦素基因检测：用总RNA抽提试剂盒提取脂肪组织总RNA，操作步骤按说明书. ⑥UltraSensitiveTM SP免疫组化法检测脂肪瘦素的表达：将标本石蜡块作5 μm厚的连续切片， 烤片， 脱蜡至水， 微波修复； 加入一抗体溶液， 1∶100兔抗人瘦素