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推拿干预对便秘模型大鼠c-kit蛋白表达影响 　 作者：赵文树， 陆金根， 曹永清 【摘要】 　　目的探讨大鼠后肢活动和便秘的关联性及推拿干预对远端结肠c-kit表达的影响, 以研究推拿治疗便秘的作用机制。方法剪除大鼠后肢股骨，建立便秘模型，经推拿治疗后，分别提取各组大鼠结肠远端细胞总蛋白, 采用免疫蛋白印迹(Western blot)蛋白半定量方法检测各组标本c-kit蛋白表达的变化。结果Western blotting 显示便秘模型大鼠结肠远端c-kit蛋白表达明显下降（P＜0.01）；推拿干预后，c-kit蛋白表达明显增加（P＜0.01）。结论大鼠后肢活动减少而引发便秘，可使大鼠结肠远端c-kit的蛋白表达减少；经推拿干预后，可使便秘大鼠结肠远端c-kit的蛋白表达显著提高，提示推拿治疗便秘与cajal 间质细胞（ICC）数目变化有关。 【关键词】 便秘 c-kit 免疫印迹 推拿 　　Abstract：ObjectiveTo approach the relativity of constipation with the decrease of leg activity, and the effect of manipulation on the expression of c-kit protein in rat’s colon with constipation. MethodsModels of constipation were made by cutting both femur of rat. After manipulation was done, expression of c-kit protein was detected by western-blotting. ResultsThe expression of c-kit protein of rat’s colon was obviously reduced on model group (P＜0.01) . The expression of c-kit protein of rat’s colon was obviously increased after treating of manipulation (P＜0.01). ConclusionThe expression of c-kit protein of rat’s colon was obviously reduced by decreasing the activity of hind limb. The expression of c-kit protein of rat’s colon was obviously increased after treating of manipulation. We can deduce that the changes of numbers of ICC are related to the manipulation in treating constipation. 　　Key words：Constipation； C-kit； Western blotting; Manipulation 　　长期卧床患者常便秘，骨折的卧床患者也便秘，根据上述观察建立大鼠便秘模型。推拿是治疗便秘的有效方法，但治疗机制研究报道较少。Cajal细胞在胃肠运动中的重要作用已被证实，Cajal细胞的数目和功能的改变将引起胃肠蠕动的异常，c-kit是卡哈耳氏细胞的标记物，运用免疫印迹方法检测大鼠结肠远端c-kit蛋白的表达，来揭示Cajal细胞数目的改变，从而阐明推拿治疗便秘的机制。 　　1 材料与仪器 　　1.1 研究对象 　　上海斯莱克实验动物有限公司提供10周龄、18周龄雄性SD大鼠各32只，随机分成8组即高龄（18周）正常对照组8只、高龄模型对照组8只、乳果糖治疗组8只、推拿干预组8只；低龄（10周）正常对照组10只、低龄模型对照组8只、乳果糖治疗组8只、推拿干预组8只。除正常对照组外，其他各组均剪除双后肢股骨1.0 cm, 单笼饲养8周后，开始治疗，2个月检测各项指标。 　　1.2 仪器与试剂 　　1.2.1 仪器高速离心机、分光光度仪、垂直板电泳转移装置、恒温水浴摇床、多用脱色摇床。 　　1.2.2 试剂单去污剂裂解液、10％分离胶、4％浓缩校、G250考马斯亮蓝溶液、10X丽春红染液、封闭液、显影液、定影液、c-kit（sc-168）兔多抗购于santa cruz公司。 　　2 方法 　　2.1 造模方法具体操作如下：SD-大鼠用20％乌拉坦，按0.4 ml／100 g体重给药，腹腔注射麻醉后，仰卧固定于木板上，75％酒精消毒下肢内侧及腹部皮