支气管哮喘病因探究.doc

支气管哮喘病因探究 　摘　要：探讨支气管哮喘(简称哮喘)发病的关系，为哮喘发病和治疗研究寻找新的突破点。方法：选取33例哮喘患者及38位健康对照者，检测两组Aiolos基因mRNA的表达水平的差异。结果： 利用比较平均循环数值(Ct)法测定mRNA的相对表达程度，哮喘患者组Aiolos基因与内参基因GAPDH的△Ct值为5.29±2.29，健康对照组△Ct值3.45±4.99，Aiolos基因在哮喘患者外周血中的表达水平显著低于健康者(P=0.046)。结论：Aiolos基因的低水平表达可能是导致哮喘发病的原因之一。 关键词：支气管哮喘；Aiolos 近些年Aiolos在淋巴瘤以及淋巴细胞白血病等血液系统疾病中已有了较深入的研究，为这些疾病的发病机制和治疗应用新的进展。为探讨Aiolos mRNA的表达差异与哮喘之间的关系，采用SYBR Green real-time PCR方法检测33例哮喘者及38位健康对照者外周血中Aiolos mRNA的表达情况，现报告如下。 　1 资料与方法 　1.1 一般资料：哮喘组选择2009年7月～2009年11月年33例哮喘患者，哮喘诊断采用2005年全球哮喘防治创议中的诊断以及病情分级标准，其中男19例，女14例，男女比例1.35:1，平均年龄(34.1±18.9)岁。患者入组的病史及临床指征包括：过敏史、哮喘家族史，皮肤划痕试验、支气管舒张试验，家族史、哮喘胸闷、喘息等症状发作频度和等；健康对照组选取38名健康体检者，其中男22名，女16名，男女比例1.37:1，平均年龄(36.3±20.5)岁。对照者1个月内无急性上呼吸道感染，胸部X线检查未见异常，均无哮喘病史、哮喘家族史及典型过敏史(包括湿疹、变应性鼻炎、变应性皮炎)，本组亲属中无哮喘患者。 　1.2 方法 　1.2.1 总RNA的抽提：取枸橼酸钠抗凝静脉血3 ml，用淋巴细胞分离液得到单个核细胞，加入RNA抽提试剂Trizol溶解，采用氯仿-异丙醇方法抽提总RNA。通过1%琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度仪检测总RNA的质量和浓度，并计算RNA的含量。 　1.2.1 利用比较CT法测定mRNA的相对表达程度，每个样品中靶基因Aiolos的相对mRNA表达水平以△Ct值表示，△Ct值=Aiolos Ct值-GAPDH Ct值。样本扩增和收集数据采用ABI Prism 7 300型荧光定量PCR仪(美国ABI公司)。 　1.3 统计学处理：实验数据采用（）表示，应用SPSS 11.0软件对数据进行处理，采用t检验，以Plt;0.05为差异有统计学意义。 　2 结果 　2.1 PCR产物分析 　2.1.1 PCR产物的特异性分析：熔解曲线分析显示，定量PCR产物的熔解曲线熔解温度均一，峰形锐利。在反应曲线的其它位置未见到波形，说明扩增产物为特异性产物，无引物二聚体及非特异性产物产生。 　2.1.2 PCR产物的动力学反应曲线分析：Aiolos和内参基因GAPDH的表扩增结束后，进入定量分析界面，得到以循环数为横坐标，荧光强度为纵坐标的动力学反应曲线；GAPDH的mRNA表达量均高于Aiolos的mRNA表达量，哮喘患者的Aiolos的mRNA表达量低于健康对照者。 　2.2 相对mRNA表达水平与哮喘的关系：每个样本Aiolos的相对mRNA表达水平直接用样品各自的内源控制物GAPDH表达来标准化加入的初始RNA量。哮喘组的△Ct值为5.29±2.29，健康对照△Ct值3.45±4.99，哮喘组患者Aiolos的mRNA表达水平明显低于健康对照者，两组之间比较差异有统计学意义，见表1。 　表1 两组Aiolos的mRNA表达水平的比较组别 例数 论文代写 平均年龄（岁） △Ct值① 论文代写 哮喘组 33 34.1±18.9 5.29±2.29 对照组 论文代写 38 36.3±20.5 3.45±4.99 　　注：两组比较，①t=2.042，P=0.046，Plt;0.05 　3 讨论 　支气管哮喘全球约有1.6亿患者，是目前最常见的慢性呼吸道疾病之一[1]，支气管哮喘发病机制跟患者气管到末梢小支气管平滑肌细胞上存在的β受体有关，当β受体功能低下，对激动剂失敏，导致细胞内环磷cAMP浓度大幅降低，不能阻止肥大细胞脱颗粒，从而环磷cAMP浓度大幅降低，不能阻止肥大细胞脱颗粒，从而引起支气管平滑肌的痉挛、黏膜水肿充血、腺体分泌量增加而诱发支气管哮喘[2]。 　Aiolos属于Ikaros家族成员，是表达在淋巴细胞内的转录因子，对淋巴细胞生长、分化和功能维持起重要作用，人类的Aiolos基因定位在17ql1.2～21，共有8个外显子和7个内含子[3]。Harker等[