晶体-细胞相互作用及肾结石.docVIP

晶体-细胞相互作用及肾结石 　关键字：肾结石 　　草酸钙(CaOx)是肾结石中最常见的晶体物质，它在生物体液中的溶解度非常低。所有人尿中的CaOx都经常处于过饱和状态，在特定的过饱和环境中可能自发产生CaOx沉淀。结石病人以及正常人的尿中常可查到CaOx结晶，而结石病人的CaOx颗粒较大。肾结石的形成是肾内一定大小的晶体潴留或粘附到肾小管上皮细胞上的最终结果［1］。通常认为决定肾结石发展的主要因素是小管液中草酸盐的浓度，结晶调节因子的浓度和活性，以及肾脏内晶体潴留。越来越多的证据表明，肾小管上皮细胞积极参与了肾结石的病理生理过程，研究CaOx晶体与肾小管上皮细胞的相互作用对探讨尿石症的发生机制有重要意义。 　　一、细胞模型的选择 　　目前已有适合使用的具有明确肾单位片段特征且能长期生长的细胞系。肾源性上皮细胞行组织培养时形成高度分化和有极性的单层细胞，顶部有微绒毛，并有连结复合体。在有渗透性的底物上培养的细胞比在硬塑料培养皿上的细胞分化程度高［2］。根据研究机制选择某一特定的细胞模型，近曲小管细胞常用于研究草酸盐转运机制，因为草酸盐的转运仅发生于肾单位的这一部分。细支以远可见CaOx晶体，因此，研究晶体与上皮细胞之间的相互作用常选择具有远曲小管或集合管特征的肾细胞。LLC-PK1和OK-1细胞分别来源于Hampshire猪和美国负鼠，保留着许多近曲小管的特征，如Na+依赖的糖、氨基酸和磷酸转运功能［3］。取自正常雄性矮脚长耳猎犬肾脏的MDCK细胞被广泛用作远曲小管或集合管的模型［4］。两个独立的细胞系具有完全不同的特征，这证明了细胞系的异质性。用于肾结石研究的另一种肾上皮细胞是BSC-1，它取自非洲绿猴，具体起源不清［5］。也有用原代培养的大鼠肾髓质集合管细胞(IMCD)研究晶体-细胞的相互作用。无论选择哪种模型系统，一般说来都要进行生理学方面的相关性研究，培养物在形态上和机能上应尽可能模拟体内的细胞模型。细胞系优于原代培养，前者在分裂繁殖过程中形成单层，利于培养。细胞可冻存，将来可恢复培养，可用同一物质重复实验。 　　二、晶体粘附 　　扫描电镜和透射电镜图像显示肾小管管腔表面吸附有晶体，细胞内也存在晶体［6］。在高草酸尿症大鼠肾脏内发现比管腔直径小得多的CaOx晶体沉积物吸附在肾小管上皮上。所有人的尿中都可查到晶体，提示晶体尿并非都是病理状态。正常人的肾小管上皮细胞可更好地抵制晶体的粘附。细胞表面或晶体表面被功能性物质如TH蛋白(THP)，肾钙素(NC)，葡胺聚糖(GAGs)以及骨桥蛋白(OPN)覆盖，从而得到保护。细胞表面糖缀合物结构和成分的变化可使细胞包被失去阻止晶体粘附的作用［7］。一水草酸钙(COM)在数秒内即可与细胞表面结合，结合量与COM浓度有密切关系，这种粘附作用可被聚阴离子肝素阻断。其它GAGs成分如硫酸软骨素A，硫酸软骨素B，硫酸乙酰肝素和透明质酸也可阻断这种粘附作用，而硫酸软骨素C除外。另两种聚阴离子聚谷氨酸和聚天冬氨酸也有这一作用。尿中的NC，枸橼酸以及OPN都可抑制晶体与细胞的结合，但THP没有这种作用。用这些物质预处理晶体可起阻断效果，而预处理细胞无效，提示这些物质是作用于晶体表面而起作用。抑制物对晶体结合的抑制遵循Langmuir吸附等温式，表明晶体上抑制物分子结合位点对二者之间的粘附至关重要。聚阴离子鱼精蛋白可迅速逆转晶体与细胞的粘附，这可解释GAGs可逆性调节细胞晶体相互作用的现象［8］。 　　至于为什么晶体对细胞表面有亲和力，似乎不存在能与晶体结合的特异性细胞表面分子。正常情况下肾小管内形成的晶体将随尿排出。在某些条件下，晶体可获得对细胞表面的高亲和力，此时晶体结合可由有吸引力的离子键或氢键介导，它必须克服快速流动的小管液产生的剪切力。这种结合的证据源于对晶体片层与IMCD细胞表面磷脂片层的对比，提示晶体与质膜间的接触是基于互补分子的静电和氢键［9，10］。另一方面，COM晶体的结合由细胞表面带负电荷的分子介导。聚阳离子可阻断COM晶体与BSC-1细胞的粘附。此外，用神经氨酸酶或肝素酶预处理的BSC-1和MDCK细胞可抑制COM晶体的结合力，提示唾液酸残基和硫酸乙酰肝素是细胞表面与晶体结合的潜在受体［6］。而且COM晶体与MDCK细胞的结合似乎与pH或温度有关，并发现由钙螯合诱导的质膜顶部变形可促进晶体的结合［4］。根据以往的研究结果推断，细胞损伤或细胞损害修复后反应性增生可使上皮极性丧失，从而触发晶体潴留。质膜的分子结构改变，细胞表面及小管液内阴离子质和量的变化，以及环境因素如pH的变化在晶体结合中可能起重要作用［11］。 　　　三、晶体内化 　　晶体一旦粘附到细胞表面，至少部分会被摄入细胞内，这代表一种保护性机制，以去除细胞表面潜在的晶体生长点。另一方面，晶