曲古抑菌素A对膀胱癌T24细胞增殖及Apaf-1及APC基因表达影响.docVIP

曲古抑菌素A对膀胱癌T24细胞增殖及Apaf-1及APC基因表达影响 　 作者：王文卫 陈俊星 潘俊 肖峻 林焕懿 陈凌武 【摘要】 【目的】 研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对人膀胱癌T24细胞的增殖抑制作用及对Apaf-1、APC基因表达的影响。 【方法】 采用3 × 10-4 mmol/L TSA作用T24细胞，MTT法检测TSA对T24细胞生长的抑制作用;流式细胞术(FCM)检测TSA作用前后T24细胞周期和凋亡的变化;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测TSA作用前后膀胱癌细胞中Apaf-1、APC mRNA表达的变化。【结果】 TSA对T24细胞的生长具有明显的抑制作用;TSA作用后T24细胞的G0/G1期比例增加，S期比例减少，细胞凋亡率增加(P lt; 0.05);RT-PCR结果显示TSA处理能明显诱导Apaf-1、APC基因表达增加。【结论】 TSA能抑制T24细胞体外生长，诱导细胞周期阻滞和凋亡，其可能通过诱导Apaf-1、APC基因表达增加而发挥体外抗膀胱癌作用。 【关键词】 膀胱癌; 曲古霉素抑菌素A; Apaf-1基因; APC基因 　Abstract： 【Objective】 To investigate the effect of Trichostatin A (TSA)， a histone deacetylase inhibitor (HDACi)， on the growth of T24 human bladder cancer cells and the expression of Apaf-1 and APC in vitro， and to explore the possible mechanism. 【Methods】 T24 cells were treated with 3 × 10-4 mmol/L TSA; After treatment， cell growth was measured by MTT assay; Cell apoptosis changes and the cell cycle distribution were examined by flow cytometry (FCM). The expression of Apaf-1 and APC mRNA was detected by RT-PCR. 【Results】 TSA significantly inhibited the proliferation of T24 cells; Flow cytometry showed that the cells in G0/G1 phase and the apoptotic rates were significantly increased after treatment with TSA， while the cells in S phase were reduced.RT-PCR results showed that the Apaf-1 and APC mRNA level were promoted after TSA treatment. 【Conclusion】 TSA can inhibit T24 cells growth in vitro through inducing cell apoptosis and cell cycle arrest， which might be related to the expression of Apaf-1 and APC. 　　组蛋白乙酰化修饰是表观遗传调控最主要的研究内容之一，其通过改变染色质的构型调控基因转录，与恶性肿瘤具有密切的关系。抑制细胞内组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase， HDAC)的活性，可增加组蛋白的乙酰化程度，具有抑制肿瘤细胞的生长，诱导分化和(或)凋亡的作用[1]。曲古抑菌素(trichostatin A，TSA)是一种氧肟酸类HDAC抑制剂，本研究应用TSA体外作用于人膀胱癌T24细胞株，观察其细胞生物学行为改变和人凋亡蛋白酶活化因子-1基因(apoptosis protease activating factor-1，Apaf-1)、结肠腺瘤性息肉病基因(adenomatous polyposis coli，APC)表达的变化，探讨TSA作用于膀胱癌的可能机制并为HDAC抑制剂应用于膀胱癌治疗提供理论依据。 　　1 材料和方法 　　1.1 细胞培养及主要试剂 　　人膀胱移行细胞癌细胞株T24购于中国科学院上海生物细胞研究所，培养于含100 mL/L胎牛血清、100