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柿叶总黄酮提取工艺探究 　 作者：张秀梅 曾祖平 王永红 【摘要】 　　目的对柿叶中总黄酮的提取工艺进行优选。方法采用正交实验法，以总黄酮含量（ｍｇ· ｇ－１ ）为指标，对乙醇浓度、溶剂量及提取次数和时间３ 种因素进行了研究。结果将柿叶最粗粉用２５ 倍８０％乙醇提取４ 次，可以获得较高的提取率。结论此工艺有效成分提取率较高，重现性好，稳定可行。 【关键词】 柿叶 总黄酮 正交实验 提取工艺 　　Abstract:ObjectiveＴｏ ｏｐｔｉｍｉｚｅ ｔｈｅ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｅｓ ｉｎ Ｐｅｒｓｉｍｍｏｎ Ｌｅａｖｅｓ ．MethodsＴｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ａｎｄ ｖｏｌｕｍｅ ｏｆ ａｌｃｏｈｏｌ， ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｔｉｍｅ ａｎｄ ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ ｗｅｒｅ ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃａｌｌｙ ｓｔｕｄｉｅｄ ｂｙ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｅｓ ａｓ ｔｈｅ ｍａｒｋｅｒ ．ResultsＴｈｅ ｍｏｒｅ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｗａｙ ｔｏ ｅｘｔｒａｃｔ ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｅｓ ｗａｓ ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ２５ ｔｉｍｅｓ ａｍｏｕｎｔ ｏｆ ８０％ ａｌｃｏｈｏｌ ｕｎｄｅｒ ｒｅｆｌｕｘ ｆｏｒ ４ ｔｉｍｅｓ．ConclusionＴｈｉｓ ｍｅｔｈｏｄ ｏｂｔａｉｎｓ ｍｏｒｅ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ ．Ｉｔ ｉｓ ｓｔａｂｌｅ ａｎｄ ｒｅｌｉａｂｌｅ． 　　Key words:Ｐｅｒｓｉｍｍｏｎ ｌｅａｖｅｓ； Ｔｏｔａｌ ｆｌａｖｏｎｅｓ； Ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ ｔｅｓｔ； Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ ｐｒｏｃｅｓｓ 　　柿树是我国的重要经济树种之一，柿叶为柿树科落叶乔木植物柿Diospyros kaki Ｌ．ｆ．的新鲜或干燥叶片。国内外研究表明，柿叶制剂、柿叶茶及柿叶提取物具有降压、利尿、抑菌、止血、降脂、抑制癌瘤生长等多方面的生理活性。现代研究表明，柿叶中的主要有效成分为黄酮类，大多以苷的形式存在［１］，其具有抗急性脑缺血损伤神经保护作用，对心血管系统有增加冠脉流量、降低血压、降低心肌耗氧量、改善全身血液循环作用，能增加小鼠对窒息性缺氧的耐力，并对大鼠急性心肌缺血有一定的保护作用。此外，柿叶黄酮还有抗氧化清除自由基、抗过敏、保肝［2］、抗炎、抗菌、抗肿瘤等功能，在防治中老年人脑动脉硬化、预防脑血栓形成、防治老年人痴呆和其它神经退行性疾病、皮肤抗衰老、美容等方面有广泛的开发应用前景［3］。为了有效利用柿叶所含的黄酮类物质，本实验以总黄酮含量为指标，采用正交实验优选了总黄酮最佳提取条件。 　　1 仪器与试药 　　１．１ 仪器ＵＶ －２２０１ 紫外可见分光光度计（Ｓｈｉｍａｄｚｕ）；倾斜式高速万能粉碎机（天津市泰斯特仪器有限公司）；ＰＢ２０３ －Ｎ 电子精密天平（Ｍｅｔｔｌｅｒ Ｔｏｌｅｄｏ 仪器上海有限公司）；ＡＪ１５０Ｌ 电子精密天平（Ｍｅｔｔｌｅｒ ｉｎ Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）。 　　１．２ 试药实验用药材采自北京市昌平区，落叶晾干，经鉴定为柿树科柿属柿Diospyros Kaki Ｌ．ｆ．；芦丁对照品（中国药品生物制品检定所，批号：０８０ －９３０３）；ＡｌＣｌ３ · ６Ｈ２ Ｏ 等均为分析纯。 　　2 方法与结果 　　２．１ 因素水平表乙醇作为提取溶剂，对乙醇浓度、溶剂量及提取次数和时间３ 种因素进行考察，每种因素分为３ 个水平，结果见表１。 　　2.2 供试品溶液的制备精密称取柿叶最粗粉（１０ ～２２ 目之间）１ ｇ 共９ 份，按照表２ Ｌ９ （３４ ）正交实验设计方案，用对应浓度和体积的乙醇回流提取相应次数和时间。回流结束后合并提取液，放冷，抽滤，滤液转移至１００ ｍｌ 或２００ ｍｌ 量瓶中，分别以其相应的提取溶剂定容，过微孔滤膜（０．４５ μｍ），作为供试品溶液。 　　表1 正交设计因素水平（略） 　　表2 L9（34）正交实验设计及结果分析（略） 　　2.3 对照品溶液的制备精密称取１２０℃干燥至恒重的芦丁对照品０．０８２ ５ ｇ 于１００ ｍｌ 量瓶中，７０％乙醇超声溶解，定容至刻度，得芦丁标准液０．８２５ ｍｇ· ｍｌ－１ 。 　　2.4 显色试剂及测定波长的选择Ａｌ（ＮＯ３ ）３ －ＮａＮＯ２ －ＮａＯＨ显色法［４］ ：精密吸取芦丁标准液０．５ ｍｌ 和供试液１＃、４＃、７＃各适量至２５ ｍｌ 量瓶中，分别加入５％ＮａＮＯ２ １．０ ｍｌ，放置６ ｍｉｎ，然后加入１０％Ａｌ（ＮＯ３ ）３１．０ ｍｌ，混匀，放置６ ｍｉｎ，再加入４．３％ＮａＯＨ１０ ｍｌ，用７０％乙醇定容至刻度，放置１５ ｍｉｎ。在１９０ ～７００ ｎｍ 范围内扫描测定吸收光谱。