电鳐乙酰胆碱受体诱导转基因小鼠重症肌无力机制.docVIP

电鳐乙酰胆碱受体诱导转基因小鼠重症肌无力机制 　 ; 作者：金桂花　李红花 ，孟繁平 ，李英信 ，李芳芳 ，孙昌元 金权鑫 【关键词】; ,,重症肌无力;受体,胆碱能;小鼠,转基因 ［摘要］ ［目的］ 探讨电鳐乙酰胆碱受体诱导人免疫球蛋白转基因小鼠实验性自身免疫性重症肌无力的机制. ［方法］ 将电鳐电器官分离并纯化的乙酰胆碱受体作为免疫原，免疫人免疫球蛋白转基因小鼠，以放射免疫方法测定小鼠血清中抗乙酰胆碱受体抗体滴度，以免疫荧光技术观察小鼠骨骼肌中抗乙酰胆碱受体抗体的结合性. ［结果］ 小鼠血清中的抗乙酰胆碱受体抗体滴度为155～539pmol，小鼠肌肉中具有人抗乙酰胆碱受体抗体. ［结论］ 电鳐乙酰胆碱受体刺激人免疫球蛋白转基因小鼠产生的人抗乙酰胆碱受体抗体，可与肌肉组织中的乙酰胆碱受体结合，导致肌肉收缩无力，可诱导重症肌无力. 　　［关键词］; 重症肌无力;受体，胆碱能;小鼠，转基因 ; ABSTRACT:OBJECTIVE To investigate the pathogenesis of experimental autoimmune myasthenia gravis（EAMG），induced with Torpedo acetylcholine receptor（AChR），in mice transgenic for human immunoglobulin（Ig）loci.METHODS Mice transgenic for human Ig loci were immunized with Torpedo AChR，isolated and purified from electronic organs of Torpedo.The titers of anti-mouse AChR antibody in the sera of mice were determined by radioimmunoassay.The binding of human anti-AChR antibodies to the AChR in the muscle of mice was measured by immunofluorescence technique.RESULTS The titers of anti-mouse AChR antibodies in the sera ranged from155to539pmol.The human anti-AChR antibodies were found to bind to the muscle section.CONCLUSION The human anti-AChR antibodies，secreted from the mice transgenic for human Ig loci，induced with Torpedo AChR，are able to bind to AChR in the mouse muscles，which leads to the damages; of AChR，resulting in the animal EAMG. ; Key words:myasthenia gravis;receptors，cholinergic;mice，transgenic ; 抗乙酰胆碱受体抗体与神经肌肉接头处的乙酰胆碱受体结合，可激活补体而使突触后膜乙酰胆碱受体遭到破坏，导致肌肉收缩无力，出现重症肌无力症状.引起重症肌无力的病因目前尚不清楚，但若给动物免疫乙酰胆碱受体或注射抗乙酰胆碱受体抗体，可引发实验性自身免疫性重症肌无力 ［1，2］ .在以乙酰胆碱受体作为免疫原建立重症肌无力动物模型中，常用由电鳐电器官制备的乙酰胆碱受体，是因为电鳐的乙酰胆碱受体含量及与哺乳类动物骨骼肌乙酰胆碱受体的同源性均较高 ［3］ .电鳐乙酰胆碱受体刺激动物产生的抗电鳐乙酰胆碱受体抗体可与动物本身骨骼肌的乙酰胆碱受体进行交叉反应.本实验室曾报道了以电鳐乙酰胆碱受体免疫人免疫球蛋白转基因小鼠建立重症肌无力动物模型 ［4］ ，其中发现实验动物出现重症肌无力的关键症状，即肌肉收缩无力，血清中亦检测到了抗电鳐乙酰胆碱受体抗体.本文探讨了电鳐乙酰胆碱受体诱导人免疫球蛋白转基因小鼠实验性自身免疫性重症肌无力的机制. ; 1 材料与方法 ; 1.1 材料; 含人免疫球蛋白mu;，gamma;1，kappa;胚系基因的转基因小鼠由荷兰马斯特里赫特大学医学院神经学系神经免疫学实验室根据文献［5，6］介绍的方法建立.电鳐乙酰胆碱受体由本实验室从电鳐电器官（Pacific Biomarine，California，USA）中分离，并经眼镜蛇毒素亲和层析纯