白花丹参及紫花丹参生化标记分析.docVIP

白花丹参及紫花丹参生化标记分析 　【摘要】 　　目的分析白花丹参和紫花丹参在蛋白水平的遗传差异。方法利用叶片过氧化物酶和种子贮藏蛋白两种生化标记对白花丹参和紫花丹参进行了分析。结果同工酶分析表明，两种丹参间过氧化物酶同工酶谱存在差异；贮藏蛋白分析表明，丹参种子蛋白主要是以盐溶性蛋白为主，水溶蛋白和醇溶蛋白较少，碱溶性蛋白更少；两种丹参种子贮藏蛋白谱带之间的差异性不明显。结论二者在蛋白水平存在一定差异。 【关键词】 紫花丹参； 白花丹参； 贮藏蛋白； 同工酶； 聚丙烯酰胺凝胶电泳法； 生化标记 　　Abstract：ObjectiveTo analyze white flower Danshen and violet flower Danshen in their 2 biochemical markers (perodiase and storage protein). MethodsTwo biochemical makers of perodiase and storage protein were analyzed.ResultThere was difference in peroxidase banding pateerns. Seed proteins of white flower Danshen and violet flower danshen were respectively extracted using distilled H2O,2.5%NaCl, 0.2%NaOH and 75% alcohol. Based on acrylamide gel electrophoresis, most of storage proteins were salt-soluble, water-soluble and aclohol-soluble proteins was less. There was a little alkali-soluble protein. ConclusionThere is difference in storge protein between white flower Danshen and violet flower Danshen. 　　Key words：White flower Danshen ; Violet flower Danshen; Storage protein; Isozyme; PAGE; Biochemical marker 　　丹参Salvia miltiorrhiza味苦、性微寒，功能活血祛淤，安神宁心，排脓止痛［1］，临床应用范围较广。就其形态学性状而言，可分白花、紫花两种。传统育种中的形态学鉴定只能揭示外观差异且受环境影响较大，不能完全揭示品种间的遗传差异。生化标记是以基因表达产物蛋白质作为遗传标记，主要包括贮藏蛋白、同工酶和等位酶标记［2］。生化标记分析是一种快速、简便、有效的遗传检测手段。作为生化标记的同工酶、非酶形式的蛋白质，已经被广泛地应用于遗传种质的分离、筛选、品种鉴定以及生物多样性、杂种优势的研究中［3～6］。 　　本研究利用贮藏蛋白和过氧化物酶同工酶两种生化标记对白花丹参和紫花丹参进行了分析，以期了解其在蛋白质性状水平的遗传差异, 为种质资源的收集和二者药效成分上的比较提供理论依据。 　 　　1 材料与方法 　　1.1 材料供试材料白花丹参和紫花丹参均由山东中医药大学药圃提供。 　　1.2 方法 　　1.2.1 过氧化物酶提取 称取1g鲜材料，冰浴研磨，加入1 ml稀释4倍的浓缩胶缓冲液（pH=6.7），冰浴超声提取15 min ，8 000 r/min，0℃离心20 min。上清液加入等体积40%蔗糖溶液混匀，作为供试溶液，可在4℃冰箱内储存备用。 　　1.2.2 蛋白质提取 蛋白质提取分为分步提取和一次性提取两种。分步提取主要研究丹参种子中各类蛋白质的组成及比例；一次性提取主要比较在不同提取液的情况下，蛋白质谱带的带型。 　　分步提取方法：取丹参种子粉碎后称取0.1 g，加入600 μl水，在60℃水浴中提取40 min，10 000 r/min离心5 min，取上清液备用，再用水按同样方法冲提1次，离心弃掉上清液。然后加入600 μl 2.5% NaCl溶液，用同样方法提取上清液备用，再用2.5%NaCl冲提1次，离心弃掉上清液，用水冲洗1次。再加入400 μl的50%异丙醇提取液，在同样条件下，提取上清液备用。最后加入400 μl 0.2%NaOH，同样条件，提取上清液备用。最后提取的各种蛋白质溶液，和样品处理液（20%甘油，0.1%溴酚蓝，20%浓缩胶缓冲液）等体积混合后用于电泳分析。 　　一次性提取方