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盐酸槐定碱注射液对DNA拓扑异构酶活性抑制作用探究 　 作者：纪远中， 刘桂敏， 胡人杰， 李德华 【关键词】 盐酸槐定碱,；,,,拓扑异构酶；,,活性作用 　　摘要：目的 研究 盐酸槐定碱对 DNA拓扑异构酶I和酶II（TOPO I、II）活性的 影响 。 方法 DNA超螺旋解旋法检测盐酸槐定碱注射液对拓扑异构酶I及酶II介导的 PBR322 DNA解旋反应的影响。结果盐酸槐定碱注射液能明显抑制 TOPO I介导的 DNA 解旋及断裂，在终浓度为6 250 μg/ml 和3 215 μg/ml 时对拓扑异构酶I均有抑制作用，且剂量--效应关系密切，但对拓扑异构酶II介导的 DNA 解旋反应无影响。结论结果提示盐酸槐定碱注射液的直接作用靶点是 DNA拓扑异构酶I，该药为拓扑异构酶I抑制剂。 　　关键词：盐酸槐定碱 ； 拓扑异构酶； 活性作用 毕业论文 　　Abstract：Objective The purpose of this study was to investigate the principle of activity of promoting DNA topoisomerase. MethodsThe effect of Sophoridine hydrochlorium on topoisomerase was measured by supercoiled DNA relaxation assay. ResultsSophoridine hydrochlorium could markedly inhibit the activity of topoisomerase I, by 6250μg/ml and 3215μg/ml respectively, could not prove that it inhibited the activity of topoisomerase II.ConclusionIt may be the fact that DNA topoisomerase I is a direct target in antitumor activity of Sophoridine hydrochlorium. 毕业论文 　　Key words：Sophoridine hydrochlorium; DNA topoisomerase; antitumor activity 论文代写 癌症是严重威胁人类健康的一类疾病，寻找有效的抗癌药物是 目前 世界医学界重要的研究课题，由于合成药物在伴随 治疗 中出现明显的副作用，天然药物越来越受到人们的重视和青睐。盐酸槐定碱是一种植物来源的天然药物，在槐树的果实中含量很高。盐酸槐定碱注射液主治癌症，疗效确切，毒副作用极低。为进一步探讨该药物的作用机理，我们以 DNA拓扑异构酶I、II为靶点，体外测定盐酸槐定碱注射液对其活性的影响，以便为临床治疗肿瘤提供更多的依据。结果报道如下。 　　1 材料和方法 论文代写 　　1.1 材料 　　1.1.1 药物盐酸槐定碱注射液由江西中医学院提供。 毕业论文 　　1.1.2 试剂PBR322DNA、溴化乙锭（EB）及二甲苯青（FF）均系 Sigma公司产品。DNA拓扑异构酶I试剂盒购自大连保生工程有限公司，DNA拓扑异构酶II系美国 USB产品，琼脂糖系 GIBCO产品，羟基喜树碱购自黄石飞云制药有限公司，鬼臼乙义苷（VP-16）购自江苏恒瑞医药股份有限公司。 毕业论文 　　1.2 方法 毕业论文 　　1.2.1 拓扑异构酶I活性的测定在20 μl的反应体系中含有10×反应缓冲液（350 mmol/L Tris-HCl pH8.0 mmol/L, 720 mmol/L氯化钾，5 mmol/L氯化镁，50 mmol/L DTT, 50 mmol/L Spermidine）2 μl,0.1% BAS 2μl， PBR322 0.36 μg,阳性对照管（羟基喜树碱）终浓度为212.5 μg/ml，10.6μg/ml。各试管分别加入不同浓度的槐定碱（终浓度分别为6 250，3 215，625 μg/ml）。拓扑异构酶I，各管用蒸馏水补充至20 μl，混匀后置37℃反应30 min，加入5 μl终止液（5%的 SDD,40%的蔗糖，0.25 mg/ml溴酚兰）终止反应。在TBE电泳缓冲液中进行琼脂糖电泳，40 V电压下，电泳4 h。溴化乙啶溶液（1 μg/μl）染色30 min,置260 nm紫外线下观察 DNA的电泳区带，并摄片记录。 　　1.2.2 拓扑异构酶II活性的测定参照 TOPO II试剂盒实验方法,20 μl的反应体系中含有10x反应缓冲液（100