石杉碱甲固体脂质纳米粒包封率测定方法探究.doc

石杉碱甲固体脂质纳米粒包封率测定方法探究 　 作者：李园，陈桐楷，林华庆，张蜀，邓红 【摘要】 目的 建立石杉碱甲固体脂质纳米粒(Hup ASLN)包封率的测定方法。方法 分别采用透析法、超滤法分离固体脂质纳米粒和游离药物,以高效液相色谱法测定石杉碱甲的含量。结果 超滤法能有效地将石杉碱甲固体脂质纳米粒与游离石杉碱甲分离，回收率为98.09%，测得3批样品的平均包封率为57.63%。结论 超滤法方便快捷，结果准确，适用于石杉碱甲固体脂质纳米粒的包封率测定。 【关键词】 石杉碱甲;固体脂质纳米粒;包封率;透析法;超滤法 　　Abstract:Objective To establish a method for the determination of the entrapment efficiency of solid lipid nanoparticles loading huperzine A (Hup ASLN). Methods The solid lipid nanoparticles and free drugs were separated by ultrafiltration and dialysis with HPLC for the assay of Hup A. Results Free drugs could be effectively separated from the Hup ASLN by ultrafiltration. The average entrapment efficiency of three batches of Hup ASLN was 57.63%,with the recovery of 98.09%.Conclusion It convenient,sensitive and accurate with ultrafiltration,and can be used to determine the entrapment efficiency of Hup ASLN. 　　Key words:huperzine A; solid lipid nanoparticles; entrapment efficiency; dialysis; ultrafiltration 　　石杉碱甲(huperzine A,Hup A)是从中草药蛇足石杉(千层塔)中分离出来的天然产物，是一种高效、可逆的胆碱酯酶抑制剂，能促进记忆再现和增强记忆保持。据文献报道，石杉碱甲治疗阿尔茨海默氏病有确切的临床疗效，是目前国际上治疗老年痴呆较为理想的候选药物[1]。但石杉碱甲生物半衰期短，口服或注射后会出现不良反应而影响其疗效[2]。近年来，固体脂质纳米粒(solid lipid nanoparticles，SLN)作为一种给药新载体，在不同给药途径中具有很大的开发潜力和市场前景。将Hup A包封于SLN内，再制成经皮给药制剂，能增加药物在局部组织的积累并起到持续释药的作用，相对减少全身吸收以避免不良反应。 　　SLN的药物包封率是处方工艺筛选与质量评价的重要指标，也是其发挥疗效的关键。本文采用高压乳匀法制备了石杉碱甲固体脂质纳米粒(Hup ASLN)，分别用透析法、超滤法测定其包封率，并分别对这两种测定方法进行比较和方法学考察，优选出准确度高的Hup ASLN包封率测定方法。 　　1 仪器与试药 　　Ultimate 3000型液相色谱仪(美国戴安公司);NS1001L型高压均质机(意大利Niro Soavi SPA. 公司);Zetasizer 3000HS 型激光粒度仪(英国Malvern公司)。 　　石杉碱甲原料药(浙江万邦药业有限公司，批号;透析袋(截留分子量8 000～13 000，上海百博有限公司);单硬脂酸甘油酯(天津市百世化工有限公司);超滤离心管(截留分子量50 000，Sartorius);泊洛沙姆188(德国BASF公司);油酸(天津市大茂化学试剂厂);甲醇、乙腈为色谱纯;其他试剂为分析纯。 　　2 方法与结果 　　2.1 Hup ASLN的制备[3,4] 　　称取1.5 g泊洛沙姆188，加适量蒸馏水超声分散至完全溶解，将其置于70 ℃恒温水浴中，作为水相;称取处方量的主药与混合脂质材料(单硬脂酸甘油酯和油酸)，主药和脂质材料比例为1∶30(质量比)，在恒温磁力搅拌器70 ℃条件下充分熔融，作为油相。在磁力搅拌下(1 000 r·min-1)，将水相滴加到油相中，保持恒温搅拌一定时间后停止加热，并继续搅拌一定时间，得初乳。将初乳在均质压力70 000～90 000 kPa下，通过高压均质机乳匀4次，即得Hup ASLN。同法制备3批，置于