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白芷扩增片段长度多态性反应体系建立及优化 　 作者：陈要臻 郭丁丁 马逾英， 陈雯，王晓东，唐琳 【摘要】 目的建立白芷扩增片段长度多态性（AFLP）反应体系及筛选出扩增条带丰富的引物。方法以12 份白芷为试材,对AFLP 分析过程中包括提取DNA的方法、DNA 的提取质量和浓度、MseⅠ/ EcoRⅠ酶切反应时间等进行了研究，从64对引物中筛选适合白芷的引物。结果改良的CTAB方法提取的DNA质量比较好，建立了一种适于白芷AFLP 银染技术的优化体系：模板DNA 的用量为400 ng ,酶切体系中MseⅠ和EcoRⅠ反应时间为4 h，筛选出了7对适合白芷的引物。以引物E+AGC/M+CAA构建的白芷种质资源的AFLP 指纹图谱,扩增带多,多态性强。结论建立了适用于白芷的AFLP反应体系，并筛选出了适合白芷的引物，为今后利用AFLP标记技术进行白芷鉴定及种质遗传多样性分析提供了标准化程序。 【关键词】 扩增片段长度多态性反应体系; 白芷 　　Abstract：ObjectiveTo establish an optimized AFLP(amplified fragment length polymorphism) analysis system of Angelica dahuruica.MethodsThe optimized AFLP analysis system was established with 12 Angelica dahuruica from different habitats after a comparative study of the essential factors which influenced the results of AFLP method. ResultsThe improved CTAB conventional method was better to AFLP than SDS method. The results of the analysis system showed that 1)the dosage of template DNA was 400ng; 2) the time of digest system was 4h; 3) the products of preamplification should be diluted to 10 times; 4)seven pairs of primer(E+AGC/M+CAA,E+ACT/M+CAC,E+AGC/M+CAC,E+AAC/M+CAC,E+ACC/M+CAC,E+AAC/M+CAG,E+ACC/M+CTC)were selected from 64 pairs by screening repeatedly. And E+AGC/ M+CAA could amplify more uniform and high sharp bands. ConclusionOur study showed that the AFLP was suitable for genetic diversification,variety identification,construction of molecular map , identification and classification. These results provide fundamentals for further molecular studies of Angelica dahuruica using AFLP marker. 　　Key words：AFLP system; Angelica dahuruica 　　扩增片段长度多态性（amplified fragment length polymorphism, AFLP）技术作为一项分子标记技术，是1992年由荷兰Keygene公司科学家Zabeau Mare和Vos pieter 发明并发展起来的一种选择扩增限制性酶切片段的方法［1］。AFLP是基于RFLP ( Restriction Fragment Length Polymorphism) 和PCR(Polymerase Chain Reaction) 相结合的DNA 分析技术。这种方法是一种选择性扩增限制性片段的方法,它结合了RFLP 和RAPD 的优点,既具有前者的可靠性，又具有后者的方便性。现已被广泛应用于生物多样性、指纹图谱构建、遗传图谱构建、基因克隆等诸多领域［2］。 　　白芷Angelica dahurica为伞形科植物，是一种常用中药，性温，味辛，具有散风除湿、通窍止痛、消肿排脓的功效。目前对白芷的研究