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线粒体损伤及检测方法探究进展 　 作者：左钱飞,张海献,鲁鹏飞 　　摘 要:线粒体是细胞活动的“能源工厂”,在各种致病因素作用下线粒体极易出现各种结构和功能损伤,这在疾病的发展中起着十分重要的影响,文章就线粒体结构和功能损伤及其检测方法作一综述。 　　关键词:线粒体损伤;mtDNA;凋亡 　　Abstract:Mitochondria are cell activities of the “energy factories”, in a variety of pathogenic factors appear vulnerable to a variety of mitochondrial structure and function of injury, which in the development of the disease plays an important role. This article on the structure and function of mitochondrial damage and its detection methods are reviewed. 　　Key words: mitochondrial injury mtDNAApoptosis 　　 　　线粒体在生物的生长、发育、代谢、衰老、疾病、死亡以及生物进化等方面都有非常重要的意义,而在各种致病因素作用下线粒体极易出现各种结构和功能损伤。在细胞凋亡过程中,内源性核酸内切酶、Caspase蛋白酶家族、信号转导系统、凋亡相关基因、氧自由基、Ca2+ 、NO、能量代谢、线粒体都参与了凋亡的发生线粒体与细胞凋亡间存在着密切关系,这在疾病的发展中起着十分重要的影响,因此对线粒体损伤的检测也有非常关键的意义。 　　1mtDNA损伤及其修复 　　1.1ROS 对mtDNA 的氧化损伤 　　人类mtDNA 编码维持细胞电子传递链和ATP生成等生理活动所必需的13 种多肽、22 种转运RNA(tRNA) 和2种核糖体RNA( rRNA)。mtDNA遭受氧化应激,将导致解偶联蛋白2 (UCP - 2) 基因、电位依赖性阴离子通道1(VDAC - 1) 、PRDX3 基因和Raf 基因等基因的受损,使其蛋白表达发生改变。因而,一旦mtDNA 受到不可修复的氧化应激,将导致线粒体呼吸链的中断、膜电位的崩溃和ATP合成障碍,导致细胞凋亡。即ROS 可导致mtDNA 损伤,mtDNA 损伤导致线粒体多肽表达改变,继发电子传递链功能下降,ATP 生成减少,线粒体膜电位下降,ROS 生成增多,细胞色素C 和凋亡诱导因子(AIF) 的释放,最终导致细胞死亡。Gonzalo R 等认为,mtDNA的突变影响了线粒体复合酶Ⅰ的活性,从而经电子漏生成的O2-会显著增多,使线粒体ROS 过量产生,而抗氧化酶的活性没有改变,从而导致线粒体内脂质和mtDNA 的氧化加强。 　　1.2mtDNA损伤修复 　　mtDNA 损伤包括DNA 单链断裂、双链断裂、碱基修饰、DNA 链间交联等。修复是指DNA 化学组成和核苷酸序列重新恢复的一种过程。mtDNA 中碱基切除修复最为普遍,并辅以其他方式修复多种损伤。如通过尿嘧啶DNA 糖苷酶、AP 核酸内切酶、DNA 聚合酶和连接酶等完成尿嘧啶和无碱基位点修复;利用甲酰嘧啶DNA 糖苷酶、8 - oxodGDNA 糖苷酶(mtODE) 、腺嘌呤DNA 糖苷酶(ADG) 和h Mutγ(变位酶γ) 等对mtDNA氧化损伤进行修复;还有转换修复、错配和烷化损伤的修复以及重组修复等。如链内交联被认为是通过重组修复机制修复,酵母线粒体光合酶利用光使DNA 中紫外光诱导产生的环苯嘧啶二聚体单体化,大鼠肝脏线粒体O6 -甲基- 鸟嘌呤DNA 甲基转移酶切除mtDNA 中O6 - 甲基- 2′- 脱氧鸟嘌呤,一些试剂如链尿菌素、亚硝基脲用于基因特异分析中证实了mtDNA 烷化损伤的特异性切除,但线粒体缺乏核苷酸切除修复机制。有人已利用一些纯化酶,如UDG、AP 内切酶、DNA 聚合酶和连接酶等构建了mtBER 机制,并用于检测不同DNA 损伤和揭示线粒体修复的生化机制。弄清什么类型DNA 修复蛋白存在于线粒体,如何调节、如何抵达线粒体等已不十分遥远,这无疑对线粒体疾病的基因治疗有重要意义。 　　2线粒体损伤与细胞凋亡 　　线粒体在细胞凋亡中的作用包括:释放Caspases激活因子如Cyto-c;丧失电子转移功能并减少能量的产生;线粒体跨膜电位的消失以及与BCL-2蛋白家族促凋亡和抑制凋亡功能相关等方面。实验证明,γ辐射、Ceramide(凋亡信号转导中的重要分子,介于促凋亡信号和凋亡过程之间)、Fas与配体结合等均可导致线粒