缺氧海马神经元中KATP对基因Bax表达影响.docVIP

缺氧海马神经元中KATP对基因Bax表达影响 　【摘要】 目的 研究缺氧海马神经元中KATP对基因Bax表达的影响。方法 对原代海马神经元进行缺氧和药物处理，倒置显微镜和NF免疫组织化学法观察细胞生长和形态，MTT法检测细胞凋亡率，RTPCR检测Bax基因mRNA表达水平。结果 与单纯缺氧组比较，缺氧+二氮嗪组和缺氧+甲苯磺丁脲组的多级神经元百分率和细胞存活率差异有显著性(Plt;0.01)。缺氧+二氮嗪组中基因Bax的mRNA表达水平与单纯缺氧组相比下降(Plt;0.01)，缺氧+甲苯磺丁脲组中基因Bax的mRNA表达水平相对于单纯缺氧组也有提高(Plt;0.05)。结论 缺氧时KATP的开放对细胞具有保护作用，它通过降低Bax的表达抑制缺氧海马神经元的凋亡。 【关键词】 KATP;Bax基因;缺氧; 海马神经元 Abstract:Objective To study the effect of KATP on gene Bax in hippocampal neurons under hypoxia condition.Method The neurons were exposed to hypoxia condition or treated with medicine. Inverted microscope and immunohistochemistry of NF were performed to assess the growth and morphology of the cells. Cell viability was measured with MTT cell assay. RTPCR was used to detect expression of Bax mRNA levels.Results Compared with hypoxia groups,the percentage of multipolar neuron and survival rate of primary cultured hippocampal neurons in diazoxide and tolbutamide with hypoxia groups showed statistical difference ( Plt;0.01). The experiments showed a significant increase in Bax mRNA levels (Plt;0.01) in neurons cultured at severe hypoxia condition compared with those cultured at normoxia. In hypoxia groups,tolbutamide increased Bax mRNA expression (Plt;0.05),while diazoxide reduced it (n=5 for each).Conclusion The activation of KATP channels could partially reduce cell death during hypoxia. And it also indicated that KATP protects hippocampal neurons from hypoxia by suppressing Bax expression. 　　Key words:KATP; Bax; hypoxia; hippocampal neuron 　　ATP敏感性钾通道广泛分布于中枢神经系统和其他外周组织中，调控多种生理活动。缺氧作为一种重要的生理应激反应，自然也受到KATP的调控，但其具体的机制还不是很清楚。Bax是一种重要的细胞调节因子，其产物可以使线粒体释放细胞色素C，从而诱导细胞进入凋亡途径。本实验选取了KATP特异性激动剂二氮嗪和抑制剂甲苯磺丁脲[1]来处理常氧和缺氧时的神经元，观察KATP通道的开关对于基因Bax表达的影响，从而初步探讨KATP对神经元保护的具体机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　实验动物 出生后1 d的SD大鼠，雌雄不限，由南方医科大学实验动物中心提供，许可证号：SCXK粤20060015。 　　主要试剂 DMEM高糖培养液干粉(GIBICO);多聚赖氨酸10 mg/L(Sigma公司,USA);血清(杭州四季青公司);甲苯磺丁脲(Sigma公司，USA);二氮嗪(Sigma公司，USA);二步法免疫组化检测试剂盒(DAKO);Trizol(Invitrogen，USA);一步法RNA PCR试剂盒(Takara，Japan)。 　　1.