老年人食管鳞状细胞癌、腺癌及化生.doc

老年人食管鳞状细胞癌、腺癌及化生 　 作者：蔡建春， 刘棣， 刘凯华， 张海萍， 钟山， 夏宁邵 【关键词】 癌,鳞状细胞；食管肿瘤,腺癌；微卫星重复；聚合酶链反应；barrett食管；化生；增生；序列分析 　　摘要: 目的 评估老年人食管鳞状细胞癌(ESCC)、食管腺癌(EADC)和Barrett化生不典型增生腺癌序列DNA微卫星的改变。 方法 应用稀释性PCR技术检测老年人ESCC、EADC和Barrett化生不典型增生腺癌序列中D2S123、D3S1616、D3S1300、BATRII、D5S346、D17S787和D18S61 7个位点DNA微卫星的改变。 结果 在非稀释DNA中，23例老年人ESCC和18例老年人EADC微卫星不稳定性(MSI)的频率分别是47.8% (11/23例)和38.9%(7/18例)，杂合性丢失(LOH)的频率分别是26.1%(6/23例)和16.7%(3/18例)，两者的MSI或LOH频率比较没有显著差别（P＞0.05）。在稀释DNA中，8例老年人正常食管鳞状上皮和Barrett化生异型增生腺癌序列的MSI和LOH频繁出现，尤其在D3S1616、D2S123、D3S1300和D17S787位点上，与非稀释DNA的MSI和LOH频率相比有显著差别（P＜0.05）。 结论 老年人ESCC和EADC微卫星改变没有差别。老年人正常食管鳞状上皮和Barrett化生异型增生腺癌组织DNA的MSI和LOH普遍存在，它们可能是EADC发生发展的早期分子事件，D3S1616、D2S123、D3S1300和D17S787位点的微卫星改变可能在此过程中起着重要作用。 　　关键词: 癌，鳞状细胞；食管肿瘤，腺癌；微卫星重复；聚合酶链反应；barrett食管；化生；增生；序列分析 　　Barrett食管发生腺癌危险性是一般人群的125倍，其中间过程是柱状化生上皮向不典型增生上皮转化，称之为Barrett化生不典型增生腺癌序列[12]。食管鳞状细胞癌(ESCC)和食管腺癌(EADC)是老年人的常见病。老年人反流性食管炎合并的Barrett食管比年轻人的更易发生不典型增生和腺癌[3]。为了更好地了解老年人ESCC和EADC的发生发展过程，笔者检测了ESCC、EADC、正常食管鳞状上皮和Barrett化生不典型增生腺癌序列组织中D2S123、D3S1616、D3S1300、BATRII、D5S346、D17S787和D18S61 7个位点DNA微卫星的改变。 　　1 材料与方法 　　1.1 病例人与标本 选自福建医科大学附属厦门第一医院病理科2002年3月～2005年10月存档手术切除食管癌石蜡标本41例，患者年龄（68.2±9.6）岁（60～80.5岁）；术前未经过化疗和放疗，标本经福建医科大学附属厦门第一医院伦理委员会批准收集。进行常规组织切片,HE染色和病理诊断。组织病理学分析：23例ESCC，18例EADC，其中8例EADC在癌组织旁同时存在Barrett化生和不典型增生上皮。由2位病理医师进行组织病理学分析并核对。 　　1.2 组织病理学分析、显微切割、DNA提取和DNA稀释 先行常规组织切片、HE染色和组织病理学分析，在显微镜下标记所要切割的组织区域。再切厚度为10 μm的组织3片，在显微镜下按照HE染色切片上的标记进行显微切割，取出组织，装入0.5 mL离心管。余下蜡块组织再行常规切片、HE染色并与切割前的切片比较（图1）。切割不同蜡块时均清洁石蜡切片机刀头和刀片，显微切割不同组织均用不同的洁净器械。采用蛋白酶K（10 mmol/L TrisHCl,pH 8.0,100 mmol/L KCl,2.5 mmol/L MgCl2,0.45% Tween 20，2.5 mg/mL蛋白酶K）消化方法提取基因组DNA：组织在50 μL蛋白酶K消化液中95 ℃变性10 min，常温冷却1 h，然后在65 ℃孵育1 h，最后在95 ℃变性10 min去除多余的蛋白酶K，混合物离心（5 000 r/min，5 min），吸出上清液，移至洁净的离心管。DNA质量测定值在1.072 3～1.240 1[D(260 nm)/D(280 nm)],DNA含量为255.36～406.98 ng/μL。8例正常鳞状上皮、Barrett化生上皮、不典型增生上皮和EADC组织的DNA分别按1∶100，1∶1 000，1∶5 000，1∶10 000和1∶50 000稀释度用三蒸水进行稀释。 　　1.3 稀释性PCR和微卫星改变 7个微卫星位点是D2S123，D3S1616，D3S1300，BATRⅡ，D5S346，D17S787和D18S61（PCR引物购自美国Research Genetics公司），分别位于hMSH2，hMLH1，F