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肺炎克雷伯菌对亚胺培南耐药机制探究 　 作者：叶惠芬 刘朝晖 周小棉 陈惠玲 赵祝香 【摘要】 目的 研究肺炎克雷伯菌对亚胺培南的耐药机制。方法 采用浓度梯度法(Etest)测定细菌对各种抗菌药物最低抑菌浓度，聚合酶链反应(PCR)扩增β内酰胺酶基因，并对扩增产物进行基因测序，用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)进行外膜蛋白(OMP)分析。用抑制试验进行主动外排机制检测。结果 4株菌株全部携带有SHV12型和DHA1型超广谱β内酰胺酶(ESBLs)基因，3株携带CTXM14型ESBLs基因；4株菌外膜蛋白分析发现，肺炎克雷伯菌亚胺培南耐药株与敏感株相比，缺少分子量在32500～47500之间的一条带，从位置判断该条带可能为OMP 36000或OMP 37000的一种外膜蛋白；主动外排检测全部为阴性。结论 同时产多种β内酰胺酶合并外膜蛋白缺失可能是导致本组肺炎克雷伯菌对亚胺培南耐药的原因。 【关键词】 肺炎克雷伯菌； β内酰胺酶； 外膜蛋白 ABSTRACT Objective To investigate the mechanism of Klebsiella pneumoniae resistant to imipenem. Methods The minimal inhibitive concentrations (MIC) of the antimicrobial agents was determined by Etest. The genes coded the βlactamase were amplified by polymerase chain reaction (PCR), and the sequences were analyzed. Outer membrane proteins (OMPs) were analyzed by sodium dodecyl sulfatepolyacrylamide gel electrophoresis (SDSPAGE). Reserpine inhibition test was used to study the active efflux. Results All of the 4 strains of K.pneumonia produced SHV12 and DHA1 genotype. They also produced other βlactamase (CTXM14 type, 3 isolates). Compared to imipenemsensitive isolates by SDSPAGE, the imipenemresistant isolates markedly lacked the protein band of about 36.71ku which might be the outer membrane proteins of Omp 36,000 or Omp 37,000 according to the electrophoresis mobility. The active efflux test was negative. Conclusion Klebsiella pneumoniae produced more than one βlactamase and the loss of outer membrane proteins may be accounted for the occurrence of imipenem resistance. KEY WORDS Klebsiella pneumoniae; βlactamase; Outer membrane protein 肺炎克雷伯菌为临床感染常见病原菌之一，可引起肺炎、尿路感染、败血症、伤口感染、脑膜炎等多种疾病。随着多重耐药菌株的日渐增多，治疗该菌引起的感染变得越来越困难［1，2］。亚胺培南是碳青霉烯类抗生素，其对革兰阴性菌产生的超广谱β内酰胺酶及AmpC酶都很稳定，因此临床上亚胺培南一直是治疗革兰阴性菌感染的有效药物。近年来，由于亚胺培南的广泛使用，国内外均发现对亚胺培南耐药的肺炎克雷伯菌，给治疗带来诸多困难。对亚胺培南耐药机制的研究以及如何减少其耐药株的产生，已成为当前该领域最为关注的焦点。我们对近年来在临床上分离的4株对亚胺培南耐药的肺炎克雷伯菌进行研究，现报道如下。 1 材料与方法 1.1 菌株来源 收集我院住院感染患者送检痰样本中分离的亚胺培南耐药肺炎克雷伯菌4株，其中从呼吸科和ICU病房分离各1株，神经科1株，干部病房1株，全部按照《全国临床检验操作规程