苦参碱对小鼠免疫功能影响.docVIP

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苦参碱对小鼠免疫功能影响

苦参碱对小鼠免疫功能影响   作者:尚智,丁涛,温富春,张伟,张殿文,纪凤兰,徐惠波 【摘要】 目的:观察苦参碱对小鼠脾淋巴细胞增殖和释放白细胞介素-2(IL-2)及腹腔巨噬细胞释放白细胞介素-1(IL-1)的影响。方法:溴化四唑蓝比色法测定脾淋巴细胞增殖,胸腺细胞增殖法和溴化四唑蓝比色法测定IL-1、IL-2活性。结果:苦参碱可明显抑制ConA和LPS诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖及ConA诱导的小鼠脾细胞释放IL-2,对LPS诱导的小鼠腹腔巨噬细胞释放IL-1亦有一定的抑制作用。结论:苦参碱可抑制体外培养小鼠脾淋巴细胞增殖和释放IL-2及腹腔巨噬细胞释放IL-1。 论文代写 【关键词】 苦参碱;免疫功能:淋巴细胞增殖;IL-1;IL-2 论文代写   苦参碱Matrin是豆科槐属植物苦参Sophora fla-vescens Ait.,苦豆子S.AlopecuroidesL,广豆根S.Sub-prostrata Chun et T.Chen等中草药的活性成分。大量 文献 报道,苦参碱具有抗肿瘤、抗炎、抗过敏、抗病毒、抗纤维化、抗心律失常、镇痛、解热、平喘等作用[1、2]。为进一步研究苦参碱的免疫调节作用,本试验观察苦参碱对体外培养小鼠脾淋巴细胞增殖和释放IL-2及腹腔巨噬细胞释放IL-1的影响。 毕业论文    1 实验材料   1.1 动物 毕业论文   Balb.c小鼠,6~7周龄,体重20~22g,吉林大学基础医学部实验动物中心提供。 1.2 药物及试剂   苦参碱由吉林省中医中药研究院提供;溴化四唑蓝(MTT)、细菌脂多糖(LPS)、刀豆蛋白A(ConA)为Sigma公司产品;二甲基亚砜(DMSO)广东汕头西陇化工厂产品;RPMI1640培养基,美国GIBCO公司产品;小牛血清(NBS)北京鼎国生物技术 发展 中心提供;其余试剂均为分析纯。 1.3 仪器   酶标仪,奥地利TECAN公司产品:CO2 培养箱,日本SANYO公司产品;倒置显微镜,日本OLYMPUS公司产品。    2 实验方法   2.1 苦参碱体外对正常小鼠T、B淋巴细胞增殖的影响 论文代写   2.1.1 正常小鼠脾淋巴细胞悬液的制备   无菌取正常小鼠脾脏,常规方法制备脾细胞悬液,用10%NBS-RBMI1640培养液调整细胞浓度5×106 .ml[3]。   2.1.2 T、B淋巴细胞增殖能力的测定 将5×106 .ml的脾细胞悬液加入96孔培养板中,100μl.孔,然后每孔加入终浓度为5μg.ml的ConA50μl,另一块培养板每孔加入使终浓度为10ug.ml的LPS50μl,然后每孔加入不同浓度的药液50μl,每个浓度设5个复孔,并设空白对照孔和阴性对照孔,将96孔培养板置于37℃5%CO 2 培养箱中培养48h后,每孔加入5mg.ml MTT10μl,继续培养4h,取出96孔板,1000r.min离心5min,弃上清,每孔加入DMSO150μl,置于微量振荡器上振荡10min,酶标仪570nm处测光吸收值A。吸光度大小反映淋巴细胞增殖能力的强弱[4]。   2.2 苦参碱体外对正常小鼠脾细胞释放IL-2的影响 论文代写   2.2.1 IL-2的粗提 常规方法制备小鼠脾细胞悬液,调细胞浓度5×106 .ml,加入24孔培养板,每孔1ml,再加入终浓度为3μg.ml的ConA0.5ml及不同浓度药液1ml,置37℃5%CO2 培养箱中培养48h,2000r.min离心10min,取上清液,经0.22um微孔滤器过滤,得粗提IL-2的待测品,分装-20℃保存待测。     2.2.2 IL-2活性的测定   常规法制备小鼠胸腺细胞悬液,加入96孔培养板,每孔50ul,使细胞终浓度为1×105 .ml,再加入终浓度为3μg.ml的ConA50ul及不同稀释度的待测样品100μl,以培养液作为阴性对照,置于37℃5%CO2 培养箱中培养24h后,每孔加入5mg.ml MTT10μl,继续培养4h,取出96孔板,1000r.min离心5min,弃上清,每孔加入DMSO150μl,置于微量振荡器上振荡10min,酶标仪570nm处测光吸收值A。吸光度大小反映IL-2活性的强弱[3]。   2.3 苦参碱体外对正常小鼠腹腔巨噬细胞释放IL-1的影响   2.3.1 IL-1的粗提   常规方法制备24孔板巨噬细胞单层,每孔加入终浓度为10ug.ml的LPS0.5ml,以激活巨噬细胞,同时每孔加入不同浓度的试药1ml,培养48h后收获上清,得诱生的IL-1粗品,-20℃保存待测[3]。   2.3.2 IL-1活性的测定 毕业论文

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