苦瓜水提取物对雄性小鼠精子影响-.docVIP

苦瓜水提取物对雄性小鼠精子影响? 　 ; 作者：胡怡秀，刘秀英，马征，胡春生，张莹莹，尹进【关键词】; 苦瓜水 雄性小鼠精子　　苦瓜作为一种药食兼用的草质藤木植物的果实，民间食用已有数百年历史，其药用价值越来越被人们所关注。随着研究的深入，人们发现苦瓜有较多的保健作用〔1-3〕和广阔的临床应用前景。对苦瓜的毒性研究发现，苦瓜对雄性动物具有较强的抗生育活性〔3〕。国内外学者采用不同方法对苦瓜食用部分进行了分离提取及鉴定，从苦瓜中曾分离出苷类、蛋白质、多肽、氨基酸、糖类、生物碱类、有机酸、脂类、甾类、萜类、微量元素等多种化学成份〔4〕。由于提取方法不同，导致苦瓜提取物成分各异，不同提取物的生物学作用亦不同。因此，本实验观察了苦瓜提取物对雄性小鼠精子的影响，旨在为更好地开发利用苦瓜系列产品提供科学依据。现报告如下。　　1 材料与方法　　1?1; 材料　　1?1?1 苦瓜水提取物 ;　　由湖南师范大学化学测试分析中心提供。　　1?1?2 实验动物及饲养 ;　　清洁级昆明种小鼠，体重25～35?g(南华大学实验动物学部)；实验动物生产许可证号为SCXX(湘)2004-0009，实验动物使用许可证号为SYXK(湘)2003-0002。实验期间动物房环境温度为21～24℃，湿度为56%～58%。　　1?2 方法〔５〕 ;　　将25只小鼠随机分为5组，每组5只。试验组设10?000，5?000，2?500?mg/(kg·bw)3个剂量，采用40?mg(kg·bw)剂量的环磷酰胺为阳性对照，蒸馏水为阴性对照，小鼠按20?ml/(kg·bw)体积灌胃，每日1次，连续5?d，于末次灌胃后的第30?d处死动物，取两侧副睾，按文献〔5〕制备精子悬液。　　1?2?1; 精子计数〔6〕 ;　　将精子悬液滴入细胞计数池内，用高倍镜计数中央大格内5个中方格的精子数，结果乘以10９即为每升悬液中的精子数。　　1?2?2 精子活动率〔6〕 　　于(20±2)℃的室温下，在10?min内完成每只鼠1?000个左右精子活动力的观察，取悬液滴片，显微镜下将精子活动状态分为4级：Ⅰ：运动活泼，直线运动；Ⅱ：运动欠活泼，直线游动；Ⅲ：原地旋转，动作迟缓；Ⅳ：毫无活力，并按下式计算精子活动率： 毕业论文 精子活动率(%)=Ⅰ+Ⅱ+ⅢⅠ+Ⅱ+Ⅲ+Ⅳ×100　　1?2?3 精子存活率采用伊红试验〔7〕。 ;　　取精子悬液和0?5%伊红水溶液各1滴混合，在1?min内高倍镜检查。活的精子不着色，死的精子染成淡红色或淡黄色，计算存活率。　　1?2?4 精子形态学观察〔5〕 ; 　　将精子悬液用4层擦镜纸过滤，吸滤液涂片，干燥后甲醇固定5?min，2%伊红染色1?h，用水轻冲、干燥。每只动物计数1?000个结构完整的精子，计算畸变精子发生率。 　 　　1?3 统计分析 ;　　数据进行χ2检验。　　2 结果　　2?1 苦瓜水提物对小鼠精子计数的影响 ;　　2?500，5?000，10?000?mg/(kg·bw)剂量组小鼠精子数分别为(76?20±26?37)，(56?40±15?11)，(61?40±11?10)×109/ml，对照组为(78?40±45?86)×109/ml。单因素方差分析显示，4组精子计数总体比较差异无统计学意义(P＞0?05)。　　2?2; 苦瓜水提物对小鼠精子存活率的影响 ; 　　2?500，5?000，10?000?mg/(kg·bw)剂量组小鼠精子生/死比例分别为0?934，0?794，0?863，对照组为1?383，χ２检验显示，3个剂量组小鼠精子生/死比例较对照组显著减低(P＜0?001)。　　2?3 苦瓜水提物对小鼠精子活动度的影响(表1) 表1 苦瓜水提物对小鼠精子活动度的影响(略) ; 毕业论文 　　χ２检验显示，5?000，10?000?mg/(kg·bw)剂量组较对照组小鼠精子活动率显著升高(P＜0?001)。　　2?4 小鼠精子形态学观察(表2) 表2 苦瓜水提取物对小鼠精子畸形发生率的影响(略) ;　　χ２检验显示，各试验组精子畸形率与阴性对照组比较差异无统计学意义(P＞0?05)，而各试验组和阴性对照组精子畸形率显著低于环磷酰胺组(P＜0?01)。提示苦瓜水提物对小鼠精子畸形发生率无明显影响。　　3 讨 论　　本实验结果表明，(1)苦瓜水提取物对精子的存活率有显著影响，3个剂量组与对照组比较分别下降了9?75%，13?79%，11?72%；(2)苦瓜水提取物能提高存活精子的活动度，5?000，10?000?mg/(kg·bw)剂量组与对照组比较，活动度有明显提高，分别较对照组提高了9?9%，16?0%；(3)苦瓜水提取物3个剂量组精子数量虽较对照