试验八花粉活力及花粉管伸长的测定试验目的通过花粉活力的测定.DOCVIP

实验八 花粉活力及花粉管伸长的测定 [实验目的] 通过花粉活力的测定，可以了解花粉的可育性，并掌握不育花粉的形态、生理特征。 熟悉测定花粉活力的几种方法。 Ⅰ 碘-碘化钾（I-KI）染色测定法 [实验原理] 禾谷类植物花粉成熟时积累淀粉较多，通常可用I-KI染成蓝色。发育不良的花粉常呈畸形，不积累淀粉，用I-KI染色，不呈蓝色，而呈黄褐色。 [器材与试剂] 1.实验仪器 显微镜，镊子，恒温箱，载玻片，盖玻片 2.实验试剂 I-KI溶液（取KI 2g溶于5～10mL蒸馏水中，然后加入1 g I2待全部溶解后，再加蒸馏水至200mL。（贮于棕色瓶中备用） 凡被染成蓝色的为发育好、活力强的花粉粒，呈黄褐色的为发育不良的花粉粒。 Ⅱ 过氧化物酶测定法 [实验原理] 具有生活力的花粉含有活跃的过氧化物酶。此酶能利用过氧化氢使各种多酚及芳香族胺发生氧化而产生颜色，依据颜色可知花粉的活性强弱。 [器材与试剂] 1．实验仪器 显微镜，载玻片，盖玻片，镊子 2．实验试剂 0.5%联苯胺[将0.5g联苯胺溶于100mL50%乙醇中（有毒，注意安全）]，0.5%ɑ-萘酚（将0.5g ɑ -萘酚溶于100mL50%乙醇中）， 0.25%碳酸钠（将0.25g碳酸钠溶于100mL蒸馏水中），实验前将上述三种溶液各取10mL混合均匀成试剂Ⅰ，0.3%过氧化氢。 3、实验材料 花粉 ［实验步骤］ 1．干洁载玻片上放少量花粉，然后加试剂Ⅰ和0.3%过氧化氢各1滴，搅匀后盖上玻片。30℃下经10min后在低倍显微镜下观察。如花粉粒为红色，则表示有过氧化物酶存在，花粉有活力，能发芽；如无色或黄色，则表示已失去活力，不能发芽。 2.观察2～3个制片，每片取5个视野，统计100粒，并计算其发芽率。 Ⅲ 氯化三苯基四氮唑法（TTC） 实验原理 见实验7种子活力的快速测定中的TTC法。 [器材与试剂] 1.实验仪器 显微镜，镊子，载玻片，盖玻片， 2.实验试剂 0.5%TTC溶液（参阅实验7-1） [实验步骤] 1.取少数花粉于载玻片上，加1～2滴TTC溶液，盖上盖玻片。 2.将制片于35℃恒温箱中放置15min。然后置于低倍显微镜下观察。凡被染为红色的活力强，淡红的次之，无色者为没有活力的花粉或不育花粉。 3.观察2～3个制片，每片取5个视野，统计100粒，然后计算花粉的活力百分率。 [注意事项] 注意需将花粉完全浸于药液中。 [实验作业] 1.用3种方法统计不同植物花粉的发芽率。 2.试比较3种方法，同一花粉的发芽率是否相同，分析其原因。 IV 花粉管生长的测定 [实验目的] 熟悉测定花粉管生长的方法及影响生长的主要因素。 [实验原理] 成熟花粉具有较强的生活力，在适宜的培养条件下便能萌发和生长。花粉的萌发和生长情况与植物种类、花粉成熟度、气候和培养条件等有关。实验中通过改变培养条件，利用正交实验法测定花粉管长度，可以找出促进花粉生长的最佳培养条件。 [器材与试剂 1.实验仪器 恒温箱，显微镜，目镜测微尺，物镜测微尺，花粉培养小室，镊子，载玻片，盖玻片。 2.实验试剂 培养基（内含琼脂0.5%，硼酸、蔗糖浓度按表7-2进行配制） [附] 培养基的配制 在配制培养基时，琼脂浓度不变，硼酸、蔗糖的浓度改变，pH和培养温度也改变，用以观察何种组合更适于花粉萌发和生长。若培养基不是当天使用，则需要高压灭菌。 确定硼酸、蔗糖、温度、pH 4种因子的水平值。实验中对每种因子选择低、中、高3种水平（以1，2，3表示，见表7-2）。 按表7-2配制培养基。 3、实验材料 刚开放或将要开放的成熟花朵 表1:因子水平表 因子水平 A 蔗糖含量/% B 硼酸浓度/（μg/mL） C 温度/℃ D pH 1 5 10 23 6。0 2 10 25 28 6。5 3 15 50 33 7。0 表2:培养基配制方案 实验组号 A 蔗糖含量/% B 硼酸浓度/（μg/mL C 温度/℃ D pH 1 5（1） 10（1） 23（1） 6.0（1） 2 5（1） 25（2） 28（2） 6.0（2） 3 5（1） 50（3） 33（3） 7.0（3） 4 10（2） 10（1） 28（2） 7.0（3） 5 10（2） 25（1） 33（3） 6.0（1） 6 10（2） 50（3） 23（1） 6.5（2） 7 15（3） 10（1） 33（3） 6.5（2） 8 15（3） 25（2） 23（1） 7.0（3） 9 15（3） 50（3） 28（2） 6.0（1） 注：括号内数字表示因子水平 [实验步骤] 1.采取刚开放或将要开放的成熟花朵（取自丝瓜、南