稳定敲低sigirr的人肾小管上皮细胞的构建及其-安徽医科大学学报.pdf

安徽医科大学学报　ＡｃｔａＵｎｉｖｅｒｓｉｔａｔｉｓＭｅｄｉｃｉｎａｌｉｓＡｎｈｕｉ　２０１５Ｆｅｂ；５０（２） ·１２９· ◇基础医学研究◇ 稳定敲低 ＳＩＧＩＲＲ的人肾小管上皮细胞的构建 及其初步功能的研究 １ １ ２ ２ １ ３ ４ ５ ５ １ 蒋克国 ，王德光 ，周海胜 ，查晓军 ，张桂霞 ，金福泉 ，季　爽 ，潘海峰 ，叶冬青 ，郝　丽 摘要　目的　建立稳定敲低单免疫球蛋白白介素 １相关受 斑狼疮（ｓｙｓｔｅｍｉｃｌｕｐｕｓｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ，ＳＬＥ）最常见 体（ＳＩＧＩＲＲ）基因的人肾小管上皮细胞株（ＨＫＣ），并初步研 的并发症之一，而肾脏受累的严重程度对ＳＬＥ患者 究其功能。方法　针对ＳＩＧＩＲＲ基因的有效靶点设计ｓｈＲＮＡ ［１－２］ 死亡率及预期寿命有显著影响 。但 ＬＮ发病机 序列，与 ＧＶ２４８ＧＦＰＰｕｒｏ慢病毒载体连接产生重组体 ［３－７］ 制尚未完全明确。研究 提示ＬＮ的发生和发展 （ＧＶ２４８ＧＦＰＰｕｒｏｓｈＳＩＧＩＲＲ）。将测序验证正确的重组体与 与肾小管上皮细胞内Ｔｏｌｌ样受体／白介素 １受体 包装质粒（ｐＭＤＬ、ｐＲｅｖ、ｐＶＳＶＧ）共转染２９３Ｔ细胞进行病毒 包装，收集病毒并感染ＨＫＣ细胞。实时荧光定量ＰＣＲ（ｑＲＴ （Ｔｏｌｌｌｉｋｅｒｅｃｅｐｔｏｒ／ＩＬ１ｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＴＬＲ／ＩＬ１Ｒ）信号 通路的活化有关，核转录因子 ＮＦＢ激活，产生趋 ＰＣＲ）和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法分析检测 ＨＫＣ细胞中ＳＩＧＩＲＲ干涉 κ 效率。应用白细胞介素１（ＩＬ１）刺激成功敲低ＳＩＧＩＲＲ的 化因子［如单核细胞趋化蛋白１（ｍｏｎｏｃｙｔｅｃｈｅｍｏｔａｃ β β ＨＫＣ细胞及对照细胞，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法检测其下游核转录因 ｔｉｃｐｒｏｔｅｉｎ１，ＭＣＰ１）、正常Ｔ细胞表达和分泌的活 子ＮＦＢ（ｐ６５）的磷酸化水平，ｑＲＴＰＣＲ分析单核细胞趋化 κ 化调节蛋白（ｒｅｇｕｌａｔｅｄｕｐｏｎａｃｔｉｖａｔｉｏｎｎｏｒｍａｌＴｃｅｌｌ 蛋白１（ＭＣＰ１）、正常Ｔ细胞表达和分泌的活化调节蛋白 ｅｘｐｒｅｓｓｅｄａｎｄｓｅｃｒｅｔｅｄｆａｃｔｏｒ，ＲＡＮＴＥＳ）］调节炎症 （ＲＡＮＴＥＳ）ｍＲＮＡ水平。结果　成功构建重组慢病毒载体 细胞向肾组织浸润和活化。有研究［８－９］提示单免疫 ＧＶ２４８ＧＦＰＰｕｒｏｓｈＳＩＧＩＲＲ。ｑＲＴＰＣＲ和 Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法均 球蛋白白介素１相关受体（ｓｉｎｇｌｅｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｉｎＩＬ１ 证实在ＨＫＣ细胞中成功敲低 ＳＩＧＩＲＲ的表达。此外，ＩＬ１β ｒｅｌａｔｅｄｒｅｃｅｐｔｏｒ，ＳＩＧＩＲＲ）对ＴＬＲ／ＩＬ１Ｒ信号通路起 刺激后，与对照细胞相比，敲低 ＳＩＧＩＲＲ的ＨＫＣ细胞（ＨＫＣ／ ｓｈＳＩＧＩＲＲ）的ｐ６５磷酸化水平上调，ＭＣＰ１和 ＲＡＮＴＥＳｍＲ 负调控作用，因此有望成为ＬＮ治疗新的潜在的靶 ＮＡ表达水平升高。结论　ＨＫＣ的炎症反应中，ＳＩＧＩＲＲ蛋白 点。该研究以人肾小管上皮细胞（ｈｕｍａｎｒｅｎａｌｔｕ 对Ｔｏｌｌ样受体／白介素１受体（ＴＬＲ／ＩＬ１Ｒ）通路起“刹车”作 ｂｕｌｅｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｃｅｌｌｓ，ＨＫＣ）作为模型，构建针