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基于地高辛标记小麦进行Southern杂交分析
植物遗传资源学报2012 ，13 (2):182-188
Journal of Plant Genetic Resources
基于地高辛标记对小麦进行Southern 杂交分析
主要影响因素的优化和验证
1，2 2 ，3 4 2 1 2 1
， ， ， ， ， ，
刘 禄 牛焱焱 雷 昊 林志珊 赵翔宇 叶兴国 张宪省
1 2
( / ， 27 1200 ; /
山东农业大学发育分子生物学实验室 国家重点实验室 山东泰安 中国农业科学院作物科学研究所 国家农作物
/ ， 100081 ;
基因资源与基因改良重大科学工程 农业部作物遗传改良与育种重点开放实验室 北京
3 4
， 230026 ; ， 100083)
中国科学技术大学 合肥 北京城市学院 北京
: DNA ， DNA Southern
摘要 以转基因小麦和野生型小麦 为材料 对利用地高辛标记对小麦基因组 进行 杂交分析的影响因
， 、 DNA 、 、 、 、 。 ，
素进行了优化研究 包括探针制备与纯化 样品 量 酶切体系 真空转印条件 杂交条件 免疫检测方法等 结果表明 对
，10 g DNA 80 l ，
随机引物标记的模板和标记后的探针进行纯化可明显提高探针的标记效率 μ 高质量的 样品在 μ 的体系中 酶切
8 ～ 12h ; ; 、
可获得良好的效果 真空转膜时使用碱性液比中性液获得的转膜效果更干净 试剂纯度 杂交温度及杂交炉转速等均
; CSPD ， X ，
对杂交效果产生重要影响 配合改进的 涂布方法 使用化学发光检测系统比单纯使用 光片显像
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