霉菌的分离纯化和鉴定.pptVIP

霉菌的分离、纯化与鉴定 怎样鉴定微生物呢？ 微生物鉴定主要是要回答两个问题： 一、它是不是某一种菌？ ——针对性； ——规范的检测鉴定方法； ——如：致病菌检测； 二、它到底是什么菌？ ——常规鉴定； ——大致的工作步骤； ——如：筛菌，潜在用途； 分离资源微生物的基本原则 一、微生物可谓无处不在，获得什么样的微生物， 取决于分离的目的： 特定类群微生物的分离（定向分离）； 获取新资源（分离未知菌）； 分离“混合菌”（完成某种功能的一组菌）； 二、分离的基本原则是： 获得目的菌； 排除非目的菌； 总思路流程 一、微生物资源的分布及样本的采集 土壤环境： 每年春季或旱雨季之交，一般在3-5月为佳；通常采集10-40cm深处的土样；若要分离放线菌和真菌，土样应放到无菌牛皮纸袋中，一般不放在瓶子或塑料袋中；如果要分离细菌，最好要保湿； 海洋环境及湿地： 0.5μm的滤膜过滤水样，以增加出菌率；Ekmann型采泥器或重锤式取样器采集；样品装入无菌瓶内，不能密封，在3h内用于实验； 极端环境： 尽量存放在与采样环境相当的条件下至菌种分离； 植物和动物： 确保样品的完整性，迅速对植物切口进行消毒，并用石蜡封住以防外来菌种入侵，用无菌装置带回；如动物粪便的采集应在动物排便后马上收集其中间部分，避免外源污染，置于无菌袋内； 二、样品的预处理 1、目的菌的富集培养 根据目的菌的生理特性，加入其所需要的营养物质及微量成分进行诱导增殖，增菌；设计特定的有利于待分离菌株生长的环境。 ——为了分离铁硫杆菌，可将样品加硫磺后培养； ——为了分离分解纤维素或角蛋白等的酶产生菌，可以将样品与 高浓度的纤维素或角蛋白（适当加入其他成分）在适当温度 下保湿培养一段时间，再进行分离； 2、减少非目的菌 ——若目的菌耐干燥，则可通过干燥减少非目的菌； ——若要分离高温菌，可在特定高温下震荡培养若干时间，以减 少非耐热菌的干扰； ——加入非目的菌的抑制剂； 3、目的菌的充分释放 ——使目的菌与样品基质分离：加入活化剂或乳化剂；震荡及超 声波处理，DDC技术；酶法或研磨等组织破碎法； 三、初筛 设计选择性培养基，稀释涂布，挑选目标菌株。 1、培养基设计原则 合适的营养物质及浓度配比，如不同的C/N源；各无机盐比例适当；合适的渗透压或水分活度；适宜的pH等； ⑴具体如下： 开发意图贯穿分离过程，使培养基“只”满足目的菌的要求， 而非目的菌不长；eg.寻找低温碱性脂肪酶产生菌 大剂量加入同类化合物；eg.酒精酵母 特殊成分；eg.维生素、氨基酸、无机盐等 抑制剂： ⑵常用培养基 ◆细菌——牛肉膏蛋白胨培养基（肉汤培养基）pH7.2-7.4； ◆放线菌——高氏一号培养基； ◆霉菌——马铃薯葡萄糖培养基（PDA）、查氏酵母膏琼脂培养基(CYA)、 麦芽汁琼脂培养基(MEA)、甘油硝酸盐琼脂培养基(G25N)、 察氏培养基(CA)、孟加拉红培养基、豆汁培养基、其他； 2、分离方法介绍 获得微生物纯培养的几种常用方法 (一)固体培养基分离方法 ⑵用液体培养基获得纯培养 3、培养条件 四、复筛 将获得的单菌落接种于复筛培养基，给予一定条件进行培养，对产物产率、性能等相关标准进行评价，即可挑出所需要的菌株； 根据目标菌的性质进行设计： 分解淀粉 分解脂肪 透明圈 分解纤维素 耐高温低温 耐酸碱高渗透压 产糖产酶效率—发酵 抑菌效果：滤纸片法、牛津杯法 初筛与复筛的区别： ◆初筛是指从大量的菌落中随机挑取进行摇瓶试验并通过检测得到一些较优菌株；