顺铂和足叶乙甙合用对卵巢癌细胞周期的影响.pdfVIP

中文 摘 要 顺铂和足叶乙贰合用对卵巢癌细胞周期的影响 摘 要 目的:卵巢恶性肿瘤是女性生殖系统三大恶性肿瘤之 一，严重危害妇女的身心健康，其发病率和死亡率仍在逐年 上升，对其早期诊断和早期治疗的研究仍面临着巨大挑战。 近年来，随着细胞分子生物学和肿瘤生物学的研究进展，人 们逐渐认识到肿瘤是一类细胞周期疾病，细胞周期的调控在 肿瘤的发生、发展中起到重要作用。许多化疗药物是针对细 胞周期某一时相发挥作用，阻滞细胞周期的正常运行，从而 达到抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡之目的。根据化疗药物作 用于细胞周期时相的不同，将其分为周期非特异性化疗药和 周期特异性化疗药。顺铂为细胞周期非特异性化疗药，在卵 巢癌的治疗中一直是首选药物，但目前随着顺铂的广泛应 用，其耐药现象日渐突出，使它的使用受到很大限制，因此， 选择合理的与之配伍的药物是提高其疗效的关键。足叶乙试 是一种植物类化疗药，为GZ/M期周期特异性药物。理论上， 细胞周期特异性化疗药和非特异性化疗药合用，可增加药物 对细胞周期的阻滞作用，加强对癌细胞的杀伤力。本实验将 通过体外研究从细胞周期动力学角度探讨顺铂与足叶乙贰 合用对卵巢癌SKOV3细胞生长的影响:MTT比色法测定二 者合用对细胞的增殖抑制率;流式细胞仪分析细胞周期分布 的变化;免疫细胞化学检A{细胞周期因子cyclinB,,P340a 和survivin蛋白的表达。将检测结果进行统计学分析，了解 三种细胞周期因子在细胞增殖中所起的作用，进一步探讨顺 中文 摘 要 铂和足叶乙贰引起细胞周期变化的可能机制，为临床制定合 理的联合化疗方案，寻求最佳治疗效果和基因靶向治疗提供 理论依据。 方法:体外培养卵巢癌 SKOV3细胞，取对数生长期细 胞进行实验分组:对照组，不加药物干预;单用顺铂组，顺 铂的作用浓度分别为0.1倍、1倍和 10倍的血浆峰浓度 (顺 铂的血浆峰浓度为3ug/ml);顺铂与足叶乙贰合用组，足叶 乙试的血浆峰浓度 (5ug/ml)分别与顺铂的上述三种浓度合 用。不同浓度的药物和细胞共同孵育24小时，应用MTT法 检测药物的细胞毒作用，酶标仪测定其A值，计算药物对细 胞的生长抑制率，利甩金氏公式判定两药合用的合并用药效 应;流式细胞分析仪检测不同药物作用下的SKOV3细胞的 周期分布，分析细胞周期分布的变化;免疫细胞化学s-P法 测定细胞周期因子cyclinB,,P34c0`2和survivin蛋白的表达， 分析对照组、单用顺铂组和顺铂与足叶乙贰合用组三种因子 表达的变化情况。统计学方法:采用SPSS10.0软件包对数 据进行统计学处理，计量资料用又士s表示，采用t检验，分 类资料采用秩和检验。判定标准:p0.05为有统计学意义。 结果: 1.顺铂和足叶乙贰对细胞生长的抑制作用:MTT结果 显示，单用顺铂组，随着药物浓度的增加，对SKOV3细胞 的抑制率明显增加;加用足叶乙俄后，在顺铂的0.1倍、1 倍和10倍血浆峰值浓度，Q值分别为1.05,1.3和1.06。根 据金氏公式的判断标准可以看出，足n-卜乙试对顺铂有明显的 协同作用，加强了顺铂的细胞毒作用，其中在顺铂的血浆峰 浓度，二者的合并用药效应最好。 2 中 文 摘 要 2.顺铂和足叶乙试处理后细胞周期分布的变化:流式 细胞分析仪检测结果显示，正常状态下的SKOV3细胞大多 数处于Go/G,期，顺铂使细胞周期发生明显变化，作用24h 后，Go/G,期的细胞比例明显减少，S期和G2/M期比例增多， 和对照组相比差异有统计学意义 ((t值分别为20.83和9.78, p0.05);足叶乙试和顺铂合用后，Go/G,期的细胞比例继续 减少，S期细胞和对照相比明显增多 (t=28.84,P-0.008), 和lift铂组相比变化无显著性 (t=2.04,P=0.08),G,/M期Lt例 升高，和对照组相比差异有极显著性 (t=46.99,P=0.0001)0 3.P匝铂和足A十乙贰对。yclinBP423`` 和survivin蛋白 表达的影响:免疫细胞化学s-P法染色，显微镜下观察， cyclin