低强度超声结合血卟啉杀伤和诱导艾氏腹水瘤细胞凋亡的的分析研究.pdfVIP

低强度超声结合血卟啉杀伤和诱导艾氏腹水瘤细胞凋亡的研究 吴二林 摘要据WHO预测，恶性肿瘤将成为21世纪危害人类健康的头号杀手，但 就目前肿瘤的治疗而言，特别是中晚期肿瘤，任何一种常规治疗(手术切除、化学 疗法、放射疗法等)均不能单独成为一种根治肿瘤的手段，综合治疗已逐渐成为治 疗肿瘤的主要方法。1989年，日本学者在光动力学疗法的基础上提出了一种新的 抗肿瘤理论，即声动力学疗法(Sonodynamic Therapy，SDT)。该理论主要是利用超 声能穿透深层组织并聚焦于特定的部位，激活富集在组织和细胞内的光敏剂产生 协同效应这一特点，达到抗癌效果，从而弥补了光动力学疗法等的局限性。因 此，SDT是具有重要理论研究意义和临床应用价值的抗肿瘤新思路，在肿瘤治疗 的方法探索方面倍受关注。 SDT提出以来已得到迅速的发展，目前国内外学者主要以离体培养的人肿瘤 细胞和动物移植肿瘤为研究对象，就不同的超声参数结合不同的光敏剂对肿瘤细 胞和肿瘤的杀伤效应及机制做了探讨，并提出了各种理论。迄今为止，SDT仍处 于实验阶段，距临床实践尚有一定的距离。为了更多积累声动力学疗法在理论研 究方面的资料，从而进一步推动该疗法的发展，使其早日应用于临床实践，本论 文在综合国内外研究进展的基础上，结合本实验室前期研究结果，依托国家自然 科学基金项目“超声激活血卟啉诱导肿瘤细胞凋亡的分子学机制的研究”的支持， 度等实验参数，通过显微和超微结构等层次对超声结合血卟啉杀伤腹水型艾氏腹 水瘤细胞(EAT)的动态变化过程进行了观察分析，同时利用AV—PI荧光双染、 TUNEL法及免疫细胞组织化学等方法对超声结合血卟啉诱导EAT细胞凋亡以及 与凋亡相关蛋自的变化进行了研究，最后通过加入自由基清除剂对超声结合血卟 啉作用效应的影响和检测细胞中MDA的含量探讨了SDT的作用机理。得出的结 论如下： 1、通过不同的时间段取材进行形态学观察分析，发现血卟啉可明显增强低 强度超声对EAT细胞的杀伤程度，并且可对EAT细胞造成继发性损伤，其作用 的敏感位点主要是细胞的膜性结构，其中线粒体是最易受损的膜性细胞器。 的聚焦超声可通过诱导EAT细胞凋亡而致其死亡。表明超声结合血卟啉在损伤细 胞而使其死亡的同时还存在诱导肿瘤细胞凋亡致其死亡的作用模式。 3、疫细胞组织化学研究表明，低强度超声结合血卟啉可能通过上调Bax的 活Caspase．3等途径诱导EAT细胞凋亡。 4、由基清除剂作用的实验研究发现，超声结合血卟啉对EAT细胞的杀伤效 应可被组氨酸和甘露醇显著抑制，而不能被SOD抑制，表明表明低强度超声结 合血卟啉杀伤EAT细胞的过程中，活性氧物质——羟自由基起了主要作用。 5、MDA含量测定的实验发现，超声结合血卟啉可明显增加细胞中MDA的 含量，提示致细胞膜脂质过氧化是超声结合血卟啉杀伤EAT细胞的另一途径，也 表明了活性氧物质在SDT中的作用。 关键词声动力学疗法；血卟啉；细胞凋亡；低强度超声；艾氏腹水瘤 II The effect andinduced ultrasoundwith killing bylow·intensity apoptosis derivativesonEAT hematoporphyrin cellinvitro WuEr-Lin Abstract tothe of tumorwill bethefirst AccordingpredicationWHO，malignant far killertohumanhealthinthe21th astheact