中华大蟾蜍和花背蟾蜍染色体同源性研究.pdfVIP

维普资讯 ；e 7 一 动 物 学 研 究 1997，18 4【)：4l5—4I9 CN 53 1040 Q ISSN 0254—5853 ZoologicalResearch 中华大蟾蜍和花背蟾蜍染色体同源性研究 王亚军 王哓飞 王喜忠 李 娟 王子淑 陈文元 ．- -- -． ．． ． ·-_ -— r (四川大 生物学系 成椰 610064) Q7 g·。Z·- 摘要 本文以培养的中华大蟾蜍 (Bufo6“ gargarizans)、花背塘蜍 (Buforaddei)的外 周血淋巴细胞为实验材料，采用 BrdU标记法和胸苷标记的方皓，获得了中华大蟾蜍与花背蟾蜍 清晰的高分辨晚复制带，确定了中华大蟾蜍每一染色体的特征性晚复制区I并就中华大蟾蜍与花 背蟾蜍的晚复制带纹进行了精确比较，发现中华大蟾蜍与花背塘蜍的染色体之间具极高同源性。 该结果说明：在相同的培养条件下，只要 BrdU捧八S期的时间较为统一，显示复制带的条件基 本一致的情况下，利用复制带研究无尾两栖类不周物种阃染色体同源性是完垒可行的。 关键词 中华大塘蜍，花背蟾蜍 复制带 P ， 特征性晚复制区， 皇堡旦堡丝 无尾两栖类可能因其染色体 DNA特殊的组织形式或染色体螺旋化程度过高，使得 G 带、R一带等显带技术在两栖类染色体的应用十分困难。迄今为止，国内外对无尾两栖 类的细胞遗传学研究多局限于C 带、AgNORs或核型分析。 Brdu作为朐苷类似物，可掺人DNA 台成过程中。这种掺人Brdu 的染色体经吖啶 橙或 Hochest33258处理，紫外光照射，可在染色体上获得深浅交替的带纹，这种带即为 复制带。该种显带技术也是 目前唯一能在两栖类染色体上获得多重带纹的最有效的方法。 Schempp等 (1981)首次将复制带技术成功引入两栖类染色体的研究，才使两栖类 染色体的精确识别成为可能。其后，陆续有少量关于两栖类复制带的文献报道。这些研究 涉及复制带的稳定性、复制带对无尾两栖类分化不明显的性染色体的特殊鉴别能力、物种 倚惟 的确定 (Schempp等 ，l98l；Schmid等 ． 1991； 尚克刚等 ， 1983；邓崇新等 ， 1984)等。但 由于文献数量少．且多局限于单个物种的研究，加之BrdU掺人 s期的时间 不同以及显带技术的不统一，终导敛不同物种蒯，甚至在同一物种 中，染色体复制带型多 变，致使不同物种 进行染色体同源性比较几乎不可能。 虽然国内、外对陌栖类物种间染色体的同源性研究极少 (Miura，1995)，但 目前 国、内外已有很多关 r无尾两栖类不同种 问有性杂交的研究，包括 中华大蟾蜍 (Bufo 6“ gargarizans)与花背蟾蜍 (Bt,fforaddei)间的有性杂交研究，取得 了很有意义的结 果。这些结果说明这两个物种在其核与核之间，包括染色体之间具协调性 (粱桂霞等， 1994)。然而其杂交成功的染色体基础是什么?染色体同源性如何? ·国家 自然科学基金资助项目 现在香港大学动物学系攻读博士 车文 l996年 】0月 9日牧到．同年 】2月25日修回 维普资讯 416 动 物 学 研 究 1B卷 本实验采用统一的 BrdU加八时间和同一显带技术，在中华大螗蜍与花背螗蜍的染色 体 }二获得了极为清晰的晚复制带。首次对这两个物种间的染色体同源性进行了精细比较， 确定了蟾蜍科 中华大螗蜍染色体上可作为每一染色体标记特征的晚复制区。特征性晚复制 区的确立以及染色体同源性的比较对无尾两栖类的基因定位、种蒯有性