基于dnd基因标记的大黄鱼原始生殖细胞发生发育的初步研究-水产学报.pdfVIP

第 ３９卷第９期 水　产　学　报 Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．９ ２０１５年９月 　 ＪＯＵＲＮＡＬＯＦＦＩＳＨＥＲＩＥＳＯＦＣＨＩＮＡ Ｓｅｐｔ．，２０１５ 文章编号：１０００－０６１５（２０１５）０９－１２７３－１０ ＤＯＩ：１０．１１９６４／ｊｆｃ．２０１５０３０９７８５ 基于ｄｎｄ基因标记的大黄鱼原始生殖细胞 发生发育的初步研究 １ １ １ １，２ １ １ １ 陈仕海 ，　蔡明夷 ，　张子平 ，　韩坤煌 ，　姜永华 ，　张伟军 ，　王艺磊 （１．集美大学水产学院，农业部东海海水健康养殖重点实验室，福建 厦门　３６１０２１； ２．福建省国家级大黄鱼原种场，宁德市富发水产有限公司，福建 宁德　３５２１０３） 摘要：在鱼类的早期胚胎发育中生殖细胞便与体细胞分离，形成所谓的原始生殖细胞 （ｐｒｉｍｏｒｄｉａｌｇｅｒｍｃｅｌｌｓ，ＰＧＣｓ）。母源性基因Ｄｅａｄｅｎｄ（ｄｎｄ）在胚胎发育中特异地表达于原始 生殖细胞，编码一种进化上保守的ＲＮＡ结合蛋白，对生殖细胞发育具有重要作用。本研究通 过ＰＣＲ获得大黄鱼ｄｎｄ基因（Ｌｃｄｎｄ）的部分ｃＤＮＡ序列，结合实时定量ＰＣＲ、整胚原位杂交等 技术，研究Ｌｃｄｎｄ在各组织和胚胎发育中的表达。实时定量ＰＣＲ结果显示：ｄｎｄ在性腺中特异 表达，且其在卵巢中的表达量高于精巢；检测的各期胚胎中都有ｄｎｄ的表达，随着胚胎发育其 表达量呈下降趋势。整胚原位杂交结果显示：Ｌｃｄｎｄ在早期卵裂阶段主要分布于分裂沟，到囊 胚期至原肠早期则开始定位于细胞内，原肠早期时定位在胚环中的中内胚层，且阳性信号增 多，暗示此时原始生殖细胞的形成。接着原始生殖细胞沿胚环向胚体形成处（胚盾）迁移；随 着胚胎的发育，发现胚体两侧的阳性信号增多；到体节发生期，阳性信号细胞分布于胚体两侧 的侧板中胚层，随着体节的发生这些细胞沿背腹轴向腹部运动；发育到孵出期时，到达了发育 中的原始生殖嵴。本研究首次使用ｄｎｄ作为较为可靠的大黄鱼生殖细胞标记，揭示了大黄鱼 原始生殖细胞的起源与迁移，为大黄鱼生殖细胞发生发育及养殖大黄鱼的育性控制研究奠定 一定的基础。 关键词：大黄鱼；原始生殖细胞；胚胎发育；ｄｎｄ基因；生殖细胞标记 中图分类号：Ｓ９１７．４　 文献标志码：Ａ ［３］ 　　有性生殖的多细胞动物通常有 ２种细胞系， １９５４年 Ｃｈｉｑｕｏｉｎｅ等 通过使用碱性磷酸酶作为 分别为生殖细胞系和体细胞系。这些动物依靠生 标记来研究小鼠（Ｍｕｓｍｕｓｃｕｌｕｓ）原始生殖细胞。 殖细胞将遗传信息传递给子代，使物种得以繁衍 生殖细胞具有许多独特的基因表达模式，一些基 和维持。在鱼类的早期胚胎发育中生殖细胞便与 因特异地在生殖细胞中表达，如 ｖａｓａ、ｄｅａｄｅｎｄ 体细 胞 分 离，形 成 所 谓 的 原 始 生 殖 细 胞 （ｄｎｄ）、ｎａｎｏｓ３［斑马鱼（Ｄａｎｉｏｒｅｒｉｏ）中命名为 ［１］ （ｐｒｉｍｏｒｄｉａｌｇｅｒｍｃｅｌｌｓ，ＰＧＣｓ） 。随着胚胎的发 ｎａｎｏｓ１］、ｄａｚｌ等母源性基因。自从斑马鱼 ｖａｓａ ［４］ 育，原始生殖细胞经起源、迁移，最终到达正在发 基因成功地应用于 ＰＧＣｓ的标记 ，越来越多的 育的性腺原基（原始性腺），之后进一步发育形成 研究者开始利用这些母源性生殖系特异表达基因 精原细胞或卵原细胞等生殖细胞，最终发育为精